A curva anormal da amplificação do PCR é causada pelos meios do transporte do vírus?

Na detecção ácida nucleica do coronavirus novo, a tecnologia muito chave é a experiência quantitativa fluorescente do PCR do tempo real do ácido nucleico, que é a tecnologia de núcleo da detecção nova do coronavirus. Assim que efeito faz os meios do transporte do vírus usados para o vírus as junções da amostra que têm na amplificação do PCR de ácidos nucleicos? Este artigo faz uma breve discussão.

O vírus transporta meios afeta a amplificação ácida nucleica do PCR?

Julgando o resultado da curva da amplificação do PCR:

O instrumento quantitativo fluorescente do PCR na detecção nova da coroa transformou-se um equipamento rotineiro para a pesquisa da biologia molecular. O desenvolvimento rápido deste método de detecção e a urgência da tarefa da detecção igualmente propuseram umas exigências mais altas para os pessoais da detecção, exigindo os ser proficientes em julgar os resultados dos dados. Para o julgamento do resultado do PCR quantitativo da fluorescência, o julgamento o mais intuitivo é considerar se a curva da amplificação é normal. Em experiências normais, você encontrará problemas com as curvas anormais da amplificação, tais como curvas descontadas da amplificação, a repetibilidade pobre entre poços múltiplos, e curvas uplifted da amplificação de amostras negativas.

Razões para a curva anormal da amplificação do PCR:

1. Confirme se os ajustes do software estão corretos. Verifique as instruções do jogo para verificar se o tempo, temperatura, número de ciclo, coleção da fluorescência, etc. são ajustados corretamente, e se o reagente selecionado contém ROX como uma tintura fluorescente da referência. Alguns resultados mostram que a curva da amplificação do gráfico do multi-componente não uplifted, que é obviamente uma amostra negativa, mas a curva do gráfico da amplificação uplifted, de modo que cruze a linha do ponto inicial, e tem pelo contrário um valor do CT. Isto é porque o software faz um erro na dedução automática da linha de base. O método manualmente de ajustar a linha de base pode ser normal redefinindo a linha de base.

2. Certifique-se de que os materiais de consumo e os acessórios do instrumento estão usados corretamente. Os materiais de consumo são mais importantes para o PCR do tempo real. Muitas curvas anormais da amplificação são causadas pelo uso impróprio dos materiais de consumo.

3. Para determinar se os reagentes usados são normais, para determinar primeiramente se os reagentes são eficazes, incluindo verificando se os reagentes se realizem dentro do período da validez, se repetidamente estão congelados e thawed muitas vezes, e se as condições do transporte são normais. Se todo o seja acima normal, a seguir você tem que considerar se há alguma negligência nos detalhes da operação.

Dos pontos acima, pode-se ver que os meios do transporte do vírus não afetarão diretamente a curva da amplificação, ele afetará somente as amostras do vírus, mas este pode ser feito com uma experiência de controle com amostras positivas para determinar se a solução da preservação do vírus tem um impacto nas amostras do vírus. Há dois tipos de meios do transporte do vírus de Desheng, o tipo neutralizado e o tipo ativado é apropriado para experiências ácidas nucleicas do PCR.