99,5% o fenol saturado Tris formulou a cor CAS.77-86-1 branca

Como é o fenol saturado Tris formulou a cor CAS.77-86-1 branca

Tris saturou o fenol é um claro - líquido transparente amarelo, a camada mais baixa é a fase do fenol, e a camada superior é o amortecedor pH>7.8 do ácido clorídrico de Tris. É fenol redistilled saturado com Tris-HCl (pH 8,0). Tem um odor pungente e contém o hydroxyquinoline do antioxidante 8. Tris saturou o fenol é usado para separar o ADN.

A configuração de Tris saturou o fenol: Remova o fenol redistilled do refrigerador, coloque-o na temperatura ambiente, e derreta-o então em um banho maria 68°C. Não o põe em um banho maria 68°C imediatamente para impedir que o vidro estoure. Adicione o hydroxyquinoline 8 a 0,1% e o álcool etílico do β-mercapto a 0,2%, (solução conservada em estoque 14.4MOL/ML), mistura bem, a solução gerencie amarelo, derrama-a em um funil separatory (pode igualmente ser realizado em uma taça), adiciona-o 1MOL/ML Tris (PH8.0) de outros solventes, repete-o após a mistura, deixa-a estar ainda até que separe; a liberação o líquido amarelo mais baixo do fenol, rejeita a camada superior, adiciona Tris contínuo sobre 1g/100ml, agita bem, remove a fase da água, adiciona o   0.1MOL/ML Tris (PH8.0) para equilibrar diversas vezes, ao pH 8,0, 0.1MOL/ML Tris (PH8.0) armazenado em uma garrafa marrom em 4 graus.

O lysate do tecido, assegura-se de que o pH seja ao redor 8,0 (adicione 0,1 volumes de Tris-HCl de 1M, pH 8,0, o ajustam a ao redor 8,0), e adiciona-se então 0,5 volumes de fenol saturado Tris (reservado durante o uso, remova o uso mais baixo da fase do fenol. A camada superior é uma solução Tris-HCl para impedir que o fenol contacte o ar e para retardar a oxidação do fenol), 0,5 volumes de clorofórmio: álcool isoamyl (24:1), agitação por 10 segundos e então banho de gelo por 15 minutos. Após a centrifugação, tome a fase da água (camada superior) e para adicionar um volume igual de isopropanol para precipitar o ADN, enxágüe-a com álcool etílico de 75%, e dissolva-a em uma quantidade apropriada de TE para uso posterior.

Tris saturou o fenol tem um pH maior de 7,8 e é usado geralmente para a extração do ADN. Entre eles, o fenol é um desnaturalizador forte da proteína, que possa desnaturar e precipitar proteínas nas pilhas ou nos tecidos. A função principal de Tris é impedir e parar a oxidação dos fenóis. Se os fenóis são oxidados, as quinona (dois anéis de benzeno) estarão formadas. Contém os radicais livres fortes, que podem danificar a estrutura de ácidos nucleicos. Ao mesmo tempo, desde que o valor de pH é maior de 7, o ADN realiza-se na fase da água e o RNA realiza-se na fase orgânica em um ambiente alcalino, de modo que o supernatant seja separado e o ADN possa ser obtido.

Tris equilibrou o fenol é altamente corrosivo, assim que evite o contato ou a inalação de pele. Se gerencie vermelho ou marrom, indica que a oxidação ocorreu e não pode ser usada.

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