Vários fatores exógenos e endógenos, tais como poluentes ambientais, radiação ionizante, quimioterapia farmacológica e metabolismo celular, podem causar várias formas de danos ao ADN.As rupturas de duplo filamento do ADN têm os danos mais graves à estabilidade do genoma e podem ameaçar a sobrevivência das célulasO estabelecimento de um método simples, rápido e sensível para a detecção dos efeitos da hibridação do ADN e da genotoxicidade é um tema de investigação muito significativo.Aqui está uma breve introdução ao método de detecção de danos no DNA.
Quais são os tipos de detecção de danos ao ADN
Os métodos de detecção de danos ao ADN incluem eletroforese por gel, espectrofotometria ultravioleta, fluorescência e eletroquímica e análise por quimioluminescência.A análise da quimioluminescência (CL) tem sido amplamente utilizada nos campos do ambiente e das ciências da vida devido à sua elevada sensibilidadeO formaldeído e o acetaldeído são poluentes ambientais, podendo até certo ponto causar danos ao ADN.Estudar a quantidade de ésteres de acridínio incorporados no ADN antes e depois do dano do formaldeído e acetaldeído, causando alterações na intensidade de quimioluminescência dos ésteres de acridínio, e estudar o comportamento de danos do formaldeído e acetaldeído no ADN.Estabelecer um método simples de análise da quimioluminescência para avaliar o grau de danos ao ADN causados pelo formaldeído e pelo acetaldeído.
Método dos ésteres de acridina para detecção de danos ambientais no ADN
1Em primeiro lugar, mergulhar a célula de luminescência de vidro utilizada numa certa quantidade de ácido nítrico concentrado durante várias horas, acidificar e, em seguida, enxaguar com água.Adicionar 20 μL de ADN do timo do bezerro de 1 mg/mL à célula de luminescência acidificada, e colocá-lo por 1 hora para fazer o DNA é adsorvido no fundo da piscina emissora de luz,e então o ADN do timo do bezerro não adsorvido é lavado com água secundária para obter a piscina emissora de luz com ADN adsorvido.
2Adicionar 50 μl de 9,6×10-7 g/mlÉster de acridíniopara a célula luminescente, e a reação de quimerização é de 1h para incorporar o AE na estrutura de cadeia dupla de DNA, e lavar o AE não quimérico com água secundária.na célula luminescente Adicionar reagentes de iniciação de luminescência em sequência para detectar a quimioluminescência gerada pela AE quimerizada no DNAQuando for detectado o dano do ADN do timo do bezerro por formaldeído e acetaldeído, adicionar reagente de dano ao ADN após quimerização AE e usá-lo após um determinado período de tempo.A segunda água lava o AE liberado após o DNA ser danificado, e o reagente de iniciação da luminescência é adicionado para detectar a intensidade de quimioluminescência do quimérico AE no ADN.
Os estudos demonstraram que o éster de acridínio pode ser usado como indicador de quimioluminescência com uma boa estrutura de dupla hélice de DNA intercalada.Este método de detecção é viável para danos de ruptura do ADN e método de detecção por quimioluminescênciaOs marcadores luminescentes de éster de acridina de Desheng possuem as propriedades de boa estabilidade hidrolítica.Estabilidade térmica e elevada relação sinal/ruído, e as condições de rotulagem são leves, a taxa de rotulagem é elevada e a separação não afeta a separação após a rotulagem. , por isso é considerado um marcador químico ideal.
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