HEPES é uma preparação bioquímica importante na indústria bioquímica. Considera-se ser um dos amortecedores importantes no campo da pesquisa biológica. O nome químico de HEPES é: O ácido de N-hydroxyethylpiperazine-1-ethanesulfonic, o caráter é pó cristalino branco, é um ácido fraco, usados frequentemente como o amortecedor zwitterionic e o intermediário farmacêutico na indústria química orgânica. É selecionado frequentemente como um amortecedor para a cultura celular devido a suas vantagens:
Produtos do lugar e do amortecedor de Desheng
1. A capacidade da decomposição de HEPES pode ser aumentada com o aumento da temperatura e ser enfraquecida com a diminuição da temperatura, mas comparado com outros amortecedores, sua constante da decomposição não muda muito com temperatura, que faz HEPES o amortecedor se transformar o amortecedor de A que melhor mantém a estrutura e a função da enzima. O amortecedor pode controlar uma escala constante do pH por um período de tempo mais longo e não tem nenhum efeito tóxico em pilhas.
2. O pH exigido para a maioria de pilhas é 7.2-7.4, HEPES tem uma boa capacidade de amortecedor nesta escala, mas o valor de pH ótimo varia com o tipo de pilha cultivado. Os fibroblasto preferem um pH mais alto (7.4-7.7), quando as linha celular subcultured exigirem o pH ácido (7.0-7.4). A maioria de meio de cultura confia no bicarbonato de sódio (NaHCO3) e no sistema do CO2 para proteger. A concentração do CO2 na fase de gás deve ser equilibrada com a concentração do bicarbonato de sódio no meio de cultura. Neste caso, o tampão de garrafa da cultura celular não deve ser parafusado demasiado firmemente para assegurar a troca do gás. Contudo, após o armazenamento por um determinado período de tempo, o pH do sistema do amortecedor aumentará com a volatilização do CO2. Neste tempo, a solução da cultura torna-se rapidamente roxa quando a pilha subcultured e é fundida, fazendo as pilhas cultivadas com este meio de cultura difíceis sobreviver. Mesmo se sobrevive, a atividade é igualmente muito baixa, e a taxa da proliferação é muito lenta. Adicionar HEPES à solução da cultura pode evitar este problema. HEPES pode ser usado como um amortecedor para substituir o bicarbonato para eliminar a limitação do ambiente da cultura do CO2 da alto-concentração. A concentração final de amortecedor de HEPES usada é geralmente 10-25mM.
Como usar HEPES:
1. HEPES pode diretamente ser adicionado à solução preparada da cultura na concentração exigida, e então ser esterilizado pela filtragem. Adicione 2,38 gramas de HEPES por 1000ml da solução da cultura, ajuste o pH a 7,2 com NaOH do lN após a dissolução, filtre-o e esterilizar-lo e o uso neste tempo, a concentração do uso de HEPES é 10 Mmol/L.
2. Pode igualmente ser preparado na solução do armazenamento de 100 x (l mol/L). Antes de usar, 99ml da solução da cultura é adicionado à solução do armazenamento do lml, e a concentração final da aplicação é ainda 10mmol/L. l mol/L (método da preparação da solução conservada em estoque de 100 x) HEPES: dissolva 23.8g HEPES na água dobro-destilada 90ml, ajuste o pH a 7.5-8.0 com NaOH 1N, a seguir dilua-o a 100ml com água, filtro e esterilizar-lo, e dispense-o os tubos de ensaio (2ml/bottle), a loja em 4℃ ou o -20℃.
Bioquímico de Desheng lembrado que quando usado como um amortecedor para a cultura celular, HEPES no meio de cultura exposto à luz visível para mais do que 3h produzirá a água oxigenada que é tóxica às pilhas. Recomenda-se que o meio de cultura esteja armazenado na obscuridade.
