Vantagens do biobuffer HEPES na cultura celular

HEPESO HEPES é uma preparação bioquímica importante na indústria bioquímica. É considerado um dos tampões importantes no campo da pesquisa biológica.Ácido N-hidroxietilpiperazina-1-etanosulfónicoÉ um ácido fraco, frequentemente utilizado como tampão zwitteriônico e intermediário farmacêutico na indústria química orgânica.É frequentemente selecionado como amortecedor para a cultura de células devido às suas vantagens:

Localização e produtos tampão da Desheng

1A capacidade de decomposição do HEPES pode ser aumentada com o aumento da temperatura e enfraquecida com a diminuição da temperatura, mas em comparação com outros tampões,a sua constante de decomposição não muda muito com a temperatura, o que tornaReservatório HEPESO tampão pode controlar uma faixa de pH constante por um período de tempo mais longo e não tem efeito tóxico nas células.

2O pH necessário para a maioria das células é de 7,2-7.4, o HEPES tem uma boa capacidade tampão nesta faixa, mas o valor óptimo do pH varia com o tipo de célula cultivada.No entanto, as linhas celulares subculturadas exigem um pH ácido (7.0-7.4). A maioria dos meios de cultura depende do bicarbonato de sódio (NaHCO3) e do sistema de CO2 para amortecimento.A concentração de CO2 na fase gasosa deve ser equilibrada com a concentração de bicarbonato de sódio no meio de culturaNeste caso, a tampa do frasco de cultura celular não deve ser atornilhada demasiado para assegurar a troca de gases.

No entanto, após o armazenamento durante um certo período de tempo, o pH do sistema tampão aumentará com a volatilização do CO2.a solução de cultura torna-se rapidamente roxa quando a célula é subculturada e sopradaMesmo se sobreviver, a atividade é também muito baixa, e a taxa de proliferação é muito lenta.A adição de HEPES à solução de cultura pode evitar este problemaO HEPES pode ser utilizado como amortecedor para substituir o bicarbonato para eliminar a limitação do ambiente de cultura de CO2 de alta concentração..

Como utilizar o HEPES:

1. O HEPES pode ser directamente adicionado à solução de cultura preparada na concentração necessária e, em seguida, esterilizado por filtração.ajustar o pH para 7.2 com lN NaOH após dissolução, filtrar e esterilizar e utilizar Neste momento, a concentração de utilização de HEPES é de 10 mmol/L.

2Antes da utilização, 99 ml de solução de cultura são adicionados à solução de armazenamento de lml, e a concentração final da aplicação é ainda de 10 mmol/L.L mol/L (100 x) Método de preparação da solução de base de HEPES: dissolver 23, 8 g de HEPES em 90 ml de água duplamente destilada, ajustar o pH para 7, 5- 8, 0 com 1 N NaOH, diluir para 100 ml com água, filtrar e esterilizar e dispensar frascos para injectáveis (2 ml/ frasco), conservar a 4°C ou - 20°C.

A Desheng Biochemical lembrou que quando usado como tampão para cultura celular,O HEPES no meio de cultura exposto à luz visível durante mais de 3 horas produzirá peróxido de hidrogénio tóxico para as células.Recomenda- se que o meio de cultura seja armazenado à escuridão.