A eletroforese do gel do Agarose é um método de uso geral para o isolamento, a identificação e a purificação de fragmentos do ADN. Quando as moléculas do ADN estão nadando no gel do agarose, têm o efeito da carga e o efeito da peneira molecular. As moléculas do ADN são negativamente - carregado na solução do pH acima do ponto isoelétrico e no movimento ao elétrodo positivo no campo elétrico. Devido à estrutura repetitiva da espinha dorsal do glycophosphate, a mesma quantidade de ADN encalhado dobro tem quase a mesma carga líquida, assim que podem mover-se para o sentido positivo na mesma velocidade.
As concentrações diferentes de gel do agarose podem separar fragmentos do ADN de 200bp a 50kb. Na solução do agarose, a baixa concentração do brometo do ethidum (EB) foi adicionada na solução do agarose. A faixa do ADN de 10NG podia ser detectada sob a luz UV. No campo elétrico, negativamente - o ADN carregado migrou ao ânodo em pH8.0.
O gel do Agarose tem as seguintes características:
(1) o tamanho molecular do ADN na matriz do gel é inversamente proporcional ao valor do logarítmo baixo, e ao maior a molécula, mais lenta a migração.
(2) a concentração do agarose em um tamanho específico da molécula linear do ADN é diferente do gel do agarose em concentrações diferentes. O logarítmo da mobilidade electrophoretic (U) do ADN é relacionado linearmente para coagular a concentração (T).
(3) quando a tensão é baixa, a taxa de migração de fragmentos lineares do ADN é proporcional à tensão aplicada. Contudo, com o aumento da intensidade de campo elétrico, a mobilidade de fragmentos do ADN com peso moleculares diferentes aumentará em escalas diferentes. Com o aumento da tensão, o espaço eficaz da separação do gel do agarose será reduzido. A fim maximizar a definição dos fragmentos do ADN maiores do que 2KB, a tensão aplicada não deve exceder 5V/cm.
(4) o comportamento electrophoretic do ADN da temperatura da eletroforese na eletroforese do gel do agarose não é afetado pela temperatura da eletroforese. A taxa de migração relativa de fragmentos do ADN de tamanhos diferentes não muda significativamente entre 4 e 30 graus, mas o gel com baixa concentração de 0,5% ou o gel de baixa temperatura de fusão do ponto são relativamente fraco, preferivelmente em 4 graus.
(de 5) o brometo de ethidium encaixado tintura da tintura fluorescente foi usado para detectar o ADN no gel do agarose. A tintura foi encaixada nos pares baixos empilhados e no ADN circular alongado e entalhado, fazendo o mais rígido e reduzindo a mobilidade linear por 15%.
(6) a composição do amortecedor da eletroforese da concentração iônica e sua concentração iônica afetam a mobilidade da eletroforese do ADN. Na ausência dos íons, tais como o emprego errado da água destilada para preparar geles, a condutibilidade é movimentos mínimos e do ADN mal. No amortecedor alto da concentração iônica (tal como o amortecedor da eletroforese de 10 x), a condutibilidade é produção de calor muito alta e óbvia.
A eletroforese do gel do Agarose é igualmente de uso geral no isolamento e a identificação de ácidos nucleicos, tais como a produção do mapa do endonuclease da identificação do ADN, da limitação do ADN, etc. devido a sua operação conveniente, o equipamento simples, o tamanho da amostra pequeno e a alta resolução, este método tem tornado dos métodos experimentais comuns na pesquisa da genética. O jogo da eletroforese do gel do Agarose contém 10 pré-formas do agarose, solução rápida de alta tensão 15mL da eletroforese, carga buffer6x do ADN 200 litros, tesouras e manuais do usuário, com 8 furo 6*6, 6 o furo 6*6, 13 o furo 6*12, 18 o furo 6*12 e as outras especificações.
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