TES tampão biológico: o "guardião estável" na precipitação e extração de DNA

Em experimentos de biologia molecular, a precipitação e extração de DNA são passos fundamentais na pesquisa genética, na tecnologia de clonagem e no desenvolvimento de reagentes de diagnóstico.A selecção deAgentes de amortecimento biológicosafeta diretamente a pureza, integridade e eficiência experimental do ADN.Ácido trimetilmetilaminoetanosulfónico (Reservatório TES), como agente tampão eficiente, demonstrou vantagens significativas no domínio da manipulação do ADN devido às suas propriedades físico-químicas e estabilidade únicas.

As propriedades químicas do TES: base científica para a capacidade de amortecimento

TES, O nome químico é ácido 2- [trihidroximetil) metilamino] -1-etanosulfônico,e os grupos de ácido sulfónico e múltiplos grupos hidroxilo na sua estrutura molecular dotam-no de excelente capacidade de amortecimentoA temperatura ambiente, o valor de pKa do TES é 7.5, e o intervalo de amortecimento efetivo abrange pH 6,8-8.2, que corresponde precisamente aos requisitos de actividade e estabilidade do ADN da maioria das enzimas biológicas.O TES apresenta uma resistência mais forte às alterações de temperatura e pode evitar eficazmente o risco de degradação do ADN induzida por baixa temperatura.

Tripla função central na extração de DNA

1Lise celular e remoção de proteínas

Durante o estágio de lisise celular, o TES inibe a atividade das enzimas do ADN e protege o ADN genómico da degradação pelo quelato de íons metálicos divalentes (como Mg 2 +, Ca 2 +) na solução.O seu sistema tampão mantém simultaneamente o pH óptimo para as proteases como a protease K (normalmente pH 7.5-8.0), acelerando a degradação das membranas celulares e a degradação das proteínas.Os experimentos mostraram que a eficiência da remoção de proteínas do sistema de lisese utilizando tampão TES é melhorada em cerca de 25% em comparação com os métodos tradicionais, estabelecendo uma boa base para as etapas de purificação subsequentes.

2Regulação selectiva da precipitação do ADN

O TES é uma solução tampão composta de ácido clorídrico Tris, EDTA e SDS (TES-EDTA-SDS), que obtém precipitação seletiva de ADN ajustando a resistência iónica da solução.Em concentrações elevadas de sal (como 2.5M NaCl), os grupos de ácido sulfónico do TES agem através de blindagem eletrostática, promovendo a repulsão dos grupos fosfatados entre as moléculas de ADN e formando um estado solúvel;Quando a concentração de sal cai abaixo de 0.5M, agregados e precipitados de ADN devido à exposição da espinha dorsal dos fosfatos. Este processo tem um efeito repulsivo sobre o ARN e outras impurezas, resultando numa pureza de recuperação de ADN superior a 95%.

3Proteção da actividade enzimática

O efeito protetor do tampão TES sobre a actividade enzimática é particularmente proeminente na limitação das reacções de clivagem enzimática.A investigação mostrou que a eficiência de corte das enzimas de restrição (como a EcoRI) utilizando o sistema de reação TES é 18% -22% superior à do tampão HEPESO seu ambiente de pH estável reduz as alterações conformacionais das enzimas, prolonga o período linear das reacções de clivagem das enzimas e garante a precisão dos experimentos de edição de genes.

Conclusão

O tampão TES apresenta vantagens insubstituíveis na precipitação e extração de DNA devido à sua excelente estabilidade de pH, propriedades de quelação de íons metálicos e efeito de proteção enzimática.Otimizando as condições experimentais e explorando novos cenários de aplicação, o TES continuará a conduzir a investigação em biologia molecular para direcções mais eficientes e precisas.O domínio do mecanismo de amortecimento e das técnicas de aplicação do TES é sem dúvida a chave para melhorar a taxa de êxito das experiências.

O tampão TES não é usado apenas em cosméticos. Suas propriedades tamponantes fazem com que desempenhe um papel importante na análise de proteínas, determinação da atividade enzimática e cultura celular.Reservatório TES, Desheng pode fornecer alta pureza e diversos tipos de matérias-primas tampão. Os clientes podem completar a aquisição de uma parada, economizando tempo e custos.Por favor, sinta-se à vontade para nos contactar para compra a qualquer momento!