Sempre adicionamos soluções tampão quando realizamos eletroforese de DNA. As soluções tampão comumente usadas incluem TAE, que contém Tris, acetato e EDTA, e TBE (Tris-borato-EDTA).
Qual é o papel do amortecedor? Uma das funções do amortecedor é manter o pH da solução estável.ocorre uma reação de oxidação no ânodo para gerar íons de oxigénio e hidrogénioA eletroforese a longo prazo tornará o ácido do ânodo e o cátodo alcalinos.Um bom sistema tampão deve ter uma forte capacidade tampão para manter o pH da solução em ambos os pólos basicamente estávelOutra função do tampão de eletroforese é fazer com que a solução tenha uma certa condutividade para facilitar a migração de moléculas de ADN.O DNA é uma substância alcalina que é carregada negativamente durante a eletroforese (pH tampão = 8) e migra do elétrodo negativo para o elétrodo positivo.
Outro componente do tampão de eletroforese é o EDTA, cujo propósito é quelar o plasma Mg2+ e impedir a ativação da DNase durante a eletroforese.O EDTA pode manter estes íons firmemente para evitar a degradação do ácido nucleicoMas deve-se notar que os íons de magnésio são também cofatores de muitas enzimas, tais como enzimas de restrição, polimerases de ADN, etc.,Portanto, a concentração de EDTA geralmente não é muito elevada (geralmente em torno de 1mM).
DeshengReservatório TRISembalagem
Então qual é melhor, TAE ou TBE? Na verdade, qual devo usar para eletroforese de DNA?
1A condutividade do TBE é maior do que a do TAE. Portanto, em comparação com o TAE, o TBE é menos propenso a causar superaquecimento no tanque de eletroforese.Recomenda-se TBE para eletroforese a longo prazo.
2. O ácido bórico é um inibidor da enzima, por isso, se você precisa separar o ADN de eletroforese para a reação de digestão, recomenda- se usar o TAE como solução tampão de eletroforese
3Para fragmentos menores que 300bp, a velocidade de migração em TBE é mais rápida em um gel de agarose de 2%.
4O TAE é adequado para a separação de grandes fragmentos. Os fragmentos maiores que 2kb migram mais rapidamente no TAE (em 0,8% de gel de agarose), e a velocidade é cerca de 10% mais rápida do que no TBE.O TAE é mais adequado para a recuperação de fragmentos de ADNEm comparação com o TBE, o TAE tem uma resolução mais elevada para o ADN superenrolado.
Em resumo, a questão de saber se o TBE ou o TAE é melhor não pode ser generalizada.O amortecedor biológico desenvolvido pela Desheng tem uma ampla gama de amortecedoresO sistema pode preparar tampões com uma ampla gama de valores de pH, e pode fornecer várias especificações de embalagem.Bem-vindo a consultar e comprar.
