Ácido 4-hidroxietilpiperazina etanossulfônico, abreviado como HEPES em inglês, possui o número CAS 7365-45-9. Apresenta-se como um pó cristalino branco e possui uma faixa de pH estável entre 6,8-8,2. Como agente tamponante biológico, regular o pH é seu uso mais comum e é altamente favorecido pelos principais fabricantes no campo dos cuidados com a pele. No entanto, seu papel crucial na detecção do vírus da raiva é pouco conhecido, e forneceremos uma introdução detalhada abaixo.
O dilema dos métodos tradicionais de detecção do vírus da raiva
Quando o vírus da raiva se reproduz em células infectadas, geralmente não causa efeitos citopáticos (CPE), e também é difícil formar placas sob condições de cultura convencionais. Embora muitos estudiosos em casa e no exterior tenham estabelecido com sucesso métodos de placa do vírus da raiva em células de embrião de galinha e células BHK-21, esses métodos têm desvantagens óbvias. Alguns têm requisitos extremamente rigorosos para as condições experimentais, exigindo controle preciso de vários fatores, como temperatura, umidade, composição do gás, etc.; Algumas etapas de operação são complicadas e exigem que técnicos profissionais passem por treinamento de longo prazo para dominá-las proficientemente, o que limita muito a promoção e aplicação desses métodos.
Aplicação inovadora de HEPES na detecção do vírus da raiva
Pesquisadores descobriram acidentalmente que HEPES pode aumentar o efeito patogênico do vírus da raiva em células infectadas. Com base nessa característica, os pesquisadores estabeleceram de forma inovadora um método de corrosão de placa HEPES simples e rápido para o vírus da raiva.
HEPES promove significativamente a formação de pontos de corrosão
No experimento, as células infectadas foram cultivadas a 37 ℃ por 3-5 dias, e então um grupo de células infectadas foi tratado com HEPES. Após o processamento, lesões celulares óbvias podem ser claramente observadas na parte inferior da cobertura. Posteriormente, foi utilizada a coloração com cristal violeta, e os pontos de corrosão eram claramente visíveis. Em nítido contraste, o grupo de células infectadas sem tratamento com HEPES não apresentou efeitos citopáticos nem formação de placas. Este resultado experimental demonstra fortemente que HEPES tem um efeito significativo na formação de placas do vírus da raiva em células BHK.
O método de corrosão HEPES tem alta sensibilidade
O ensaio de placa HEPES não é apenas fácil de operar, mas também tem bom desempenho na titulação de títulos de infecção viral. Dados experimentais mostram que existe uma relação clara de título entre o número de placas formadas após a infecção viral e a diluição do vírus. Tomando a cepa CTN-BHK do vírus da raiva como exemplo, os títulos de infecção foram determinados usando o ensaio de placa HEPES e o ensaio em camundongos, respectivamente. Após quatro medições consecutivas, descobriu-se que o número de placas medidas pelo método de placa HEPES variou de 1,0 × 10 ° a 4,0 × 10 * PFU/ml, enquanto os títulos de infecção medidos pelo método em camundongos estavam entre 6,0-6,8log ou 1,0 × 10 ° a 6,3 × 10/ml. Este resultado demonstra totalmente a consistência na sensibilidade entre o método rápido de placa HEPES e o método em camundongos.
O método de corrosão HEPES tem vantagens notáveis
Ao estudar a titulação do título de infecção das cepas CTN-181 e CTN-BNK do vírus da raiva, descobriu-se que o uso de HEPES pode induzir e aumentar efetivamente o efeito patogênico do vírus da raiva em células infectadas. O método de operação específico é o seguinte: após a infecção das células pelo vírus, cultive-as a 37 ℃ por 3-5 dias, adicione 50-100mmol/L de HEPES gota a gota sobre a cobertura do meio semi-sólido de metilcelulose, tinja com solução de cristal violeta após 24 horas e seque à temperatura ambiente para calcular diretamente o número de pontos de corrosão a olho nu. Comparado com os relatórios de literatura anteriores sobre métodos de corrosão, este método tem muitas vantagens, como velocidade, simplicidade, economia, sensibilidade e facilidade de domínio.
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