Company News About O lysis bufferCAS7365-45-9 de HEPES é usado para extrair a proteína nucleoplasmic
HEPES é o ácido 4 hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonic (ácido), um pó de cristal branco de N'-a-hydroxythylpiperazine-N'-ethanesulfanic, o amortecedor do íon de hidrogênio, que pode controlar uma escala constante do pH por muito tempo. A escala de amortecedor eficaz é pH6.8-8.2. De uso geral para preparar o amortecedor do lysis da extração da proteína, o amortecedor da cultura celular, etc.
A constante da dissociação de HEPES é 7,5. Quando equimolar a mistura de HEPES e de seu Na-HEPES, o pH da solução é 7,5. Geralmente, uma concentração de molar fixa de HEPES é preparada primeiramente, e o pH é ajustado então ao valor especificado com uma base forte (NaOH geralmente de uso geral). Aqui, o NaOH serve somente para fornecer o OH. É igualmente possível usar outras bases fortes tais como o KOH. Quando a diferença do pH é grande, use o NaOH concentrado. Para ajustar-se, use o NaOH diluído. Se o sólido do NaOH é adicionado diretamente, o erro é demasiado grande, e quando o NaOH é exotérmico dissolvido e mudar a temperatura pode afetar a precisão do elétrodo do pH.
Preparação do amortecedor do lysis de HEPES:
| Solução A do Lysis: | Solução B do Lysis: | ||
| HEPES | 10mmol/L, pH7.9 | HEPES | 20mmol/L, pH7.9 |
| KCl | 10mmol/L | NaCl | 420mmol/L |
| MgCl2 | 1.5mmol/L | MgCl2 | 1.5mmol/L |
| DTT | 1mmol/L | DTT | 0.5mmol/L |
| 甘油 | 5% | glicerina | 25% |
| O EDTA | 0.2mmol/L | O EDTA | 0.2mmol/L |
| NP-40 | 1% | ||
| PMSF (adicione antes de usar) | 1mmol/L | PMSF (adicione o depois de uso) | 0.5mmol/L |
| aprotinin | 3mg/L | aprotinin | 5mg/L |
| leupeptin | 3mg/L | leupeptin | 5mg/L |
| pepstainA | 2mg/L | pepstainA | 3mg/L |
Etapas:
1. Recolha as pilhas em um tubo do EP e em um centrifugador (4000r/min, 5min, 4 graus).
2. Lave três vezes com PBS, centrifugue-as como acima, rejeite o supernatant.
3. Adicione o μl 100 do amortecedor A, incube-o no gelo para 10 minuto, centrifugue-o (14000 r/min, 1 minuto), e rejeite-o o supernatant.
4. Resuspend a pelota em 60 microlitros do amortecedor B, misture-a bem, centrifugador no gelo para 30min, centrifugador (14000r/min, 15min, 0 graus), recolha-ao supernatant e rejeite-à pelota.
Entre eles, o papel do lysate A é usado principalmente para liberar proteínas citoplasmáticas e proteínas da membrana, o lysate B é usado para liberar proteínas nucleares, NP-40 é um surfactant e um detergente, seu papel é ambos que destrói a membrana de pilha (suave), e pode combinar com a proteína liberada para impedir a precipitação, assim mais da proteína citoplasmática e a proteína da membrana pode ser removida depois que o supernatant é removido pela centrifugação na primeira etapa. Depois que a proteína nuclear é extraída, pode ser dializada com lysate A para 2h e ser combinada para o IP; ou diluído com outras soluções e substituído com os tubos de centrifugador concentrados para o IP ou as outras experiências.
As matérias primas principais dos reagentes diagnósticos de Desheng in vitro são: 1. amortecedor Tris do Bis, BICINE, HEPES, CAPS, ESPANADORES, TORNEIRAS, EPPS, MOPSO, TUBULAÇÕES, VITALIDADE; 2. luminol quimiluminescente dos reagentes, isoluminol, éster DMAE-NHS da acridina, éster NSP-DMAE-NHS da acridina, sal NSP-SA da acridina, sal NSP-SA-NHS da acridina, hydrazide NSP-SA-ADH da acridina, éster ME-DMAE-NHS da acridina; 3. Os reagentes TOOS de Trinder novo, PARTES SUPERIORES, DEMORAS, ADPS, CUMES, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS; 4. o gel para aditivos do tubo da coleção do sangue, heparina da separação da Anti-irradiação do sódio, heparina do lítio, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, promove o coagulante, o pó da coagulação, etc. além, igualmente produz os meios do transporte do vírus e o carbomer 940/980. Amigos bem-vindos a vir comprar.
