Reservatório HEPESé um ácido 4-hidroxietilpiperazina-etanosulfônico (ácido N?? -a-hidroxietilpiperazina-N?? -etanosulfônico), um pó de cristal branco, um tampão para íons de hidrogénio, que pode controlar uma faixa de pH constante durante muito tempo.O intervalo de amortecimento eficaz é pH 6,8-8.2. Comumente utilizado para preparar tampão de lisis de extracção de proteínas, tampão de cultura celular, etc.
A constante de dissociação do HEPES é 7.5Quando a mistura equimolar de HEPES e seus Na-HEPES, o pH da solução é 7.5Geralmente, uma concentração molar fixa de HEPES é preparada primeiro e, em seguida, o pH é ajustado ao valor especificado com uma base forte (geralmente comumente utilizada NaOH).O NaOH serve apenas para fornecer OH. Também é possível usar outras bases fortes, como KOH. Quando a diferença de pH é grande, use NaOH concentrado. Para ajuste fino, use NaOH diluído.O erro é muito grande., e quando o NaOH é dissolvido Exotérmico e alterar a temperatura pode afetar a precisão do eletrodo de pH.
Preparação de tampão de lise HEPES:
| Solução de Lise A: |
Solução de Lise B: |
| HEPES |
10 mmol/L, pH7.9 |
HEPES |
20 mmol/L, pH7.9 |
| KCl |
10 mmol/l |
NaCl |
420 mmol/l |
| MgCl2 |
1.5 mmol/l |
MgCl2 |
1.5 mmol/l |
| DTT |
1 mmol/l |
DTT |
0.5 mmol/l |
| 甘油 |
5% |
glicerina |
25% |
| EDTA |
0.2 mmol/L |
EDTA |
0.2 mmol/L |
| NP-40 |
1% |
|
|
| PMSF (Adicionar antes da utilização) |
1 mmol/l |
PMSF (Adicionar após utilização) |
0.5 mmol/l |
| Aprotinina |
3 mg/l |
Aprotinina |
5 mg/l |
| Leupeptina |
3 mg/l |
Leupeptina |
5 mg/l |
| Pepstaína |
2 mg/l |
Pepstaína |
3 mg/l |
Passos:
1Recolher as células num tubo EP e centrifugá-las (4000 r/min, 5 min, 4 graus).
2. Lavar três vezes com PBS, centrifugar como acima, descartar o supernatante.
3Adicionar 100 μl de tampão A, incubar em gelo durante 10 min, centrifugar (14000 r/min, 1 min) e descartar o supernatante.
4. Re-suspender o pellete em 60 microlitros de tampão B, misturar bem, centrifugar no gelo durante 30 minutos, centrifugar (14000r/min, 15min, 0 graus), recolher o supernatante e descartar o pellete.
Entre eles, o papel do lisato A é usado principalmente para liberar proteínas citoplasmáticas e proteínas da membrana, o lisato B é usado para liberar proteínas nucleares, o NP-40 é tanto um surfactante quanto um detergente,A sua função é a destruição da membrana celular (leve), e pode combinar-se com a proteína liberada para evitar a precipitação,Assim, a maior parte da proteína citoplasmática e proteína da membrana pode ser removido após o supernatante é removido por centrifugação na primeira etapaApós a extracção da proteína nuclear, pode ser dialisada com lisato A durante 2 horas e combinada para IP;ou diluído com outras soluções e substituído por tubos de centrífuga concentrados para IP ou outras experiências.
As principais matérias-primas dos reagentes de diagnóstico in vitro da Desheng são: 1.Reservatório biológico Tris, BICINE, HEPES, CAPS, MOPS, TAPS, EPPS, MOPSO, PIPES, PEP; 2. Reagentes quimiluminescentes luminol, isoluminol, éster de acridina DMAE-NHS, éster de acridina NSP-DMAE-NHS, sal de acridina NSP-SA,Sal de acridina NSP-SA-NHSOs reagentes do novo Trinder são TOOS, TOPS, ADOS, ADPS, ALPS, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS; 4.Gel de separação anti-irradiação para aditivos de tubos de colheita de sangue, heparina de sódio, heparina de lítio, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, promovem coagulantes, pó de coagulação, etc. Além disso, também produz meios de transporte de vírus e carbomero 940/980.Bem-vindos amigos para comprar.
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