Como você escolhe os amortecedores biológicos para a cromatografia?

A cromatografia é frequentemente usada para a separação e purificação de proteínas em laboratório. Neste processo, as variações de PH estão relacionadas à capacidade de separação do sistema.Se o pH do solvente estiver próximo de pKa, por exemplo, pequenas alterações no PH podem afectar fortemente a retenção e, consequentemente, os resultados da separação.Uma vez que a retenção de compostos ionizáveis é especialmente sensível à variável PH.

De acordo com a literatura relevante em cromatografia, descobrimos que, embora oBase Trise MES são muitas vezes as melhores opções para esta técnica, outros tampões também foram utilizados na cromatografia de troca de cátions, cromatografia de troca de aniões,Cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) e outras técnicas semelhantesAbaixo estão os 10 melhores tampões para sua referência.

1) Reservatório BIS-TRIS

Intervalo de pH adequado: 5,8 - 7.2

PKA (25°C): 6.46

Peso molecular: 209,2 g/mol

Utilizado como amortecedor durante a cromatografia de troca de aniões (Preocupações: vários componentes num sistema cromatográfico podem competir pela ligação a metais com este amortecedor)

2) Reservatório BES

Intervalo de pH adequado: 6,4 - 7.8

PKA (25°C): 7.09

Peso molecular: 213,2 g/mol

Utilizado como amortecedor de ligação e como eluente na cromatografia de troca catiônica / como amortecedor na cromatografia de filtragem por gel

3) tampão de bicina

Faixa de pH adequada: 7,6 - 9.0

PKA (25°C): 8.26

Peso molecular: 163,2 g/mol

Utilizado como amortecimento de fase móvel e como eluente na cromatografia de troca catiônica

4) Reservatório CAPS

Faixa de pH adequada: 9,7 - 11.1

PKA (25°C): 10.40

Peso molecular: 221,32 g/mol

Utilizado como amortecimento de ligação e como eluente na cromatografia de troca catiônica

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5) tampão HEPES

Intervalo de pH adequado: 6,8 - 8.2

PKA (25°C): 7.48

Peso molecular: 238,3 g/mol

Utilizado como tampão de ligação e como eluente na cromatografia de troca catiónica num método de diálise inversa em duas fases para ensaios de liberação in vitro

6) Reservatório MES

Intervalo de pH adequado: 5,5 - 6.7

PKA (25°C): 6.10

Peso molecular: 195,2 g/mol

Utilizado como amortecedor na eletrocromatografia capilar, cromatografia por filtração por gel, cromatografia por coluna de fosfocelulose, cromatografia por interação hidrofóbica e cromatografia por troca de cátions

7) Reservatório MOPS

Faixa de pH adequada: 6,5 - 7.9

PKA (25°C): 7.14

Peso molecular: 209,3 g/mol

Utilizado como amortecimento para a purificação de proteínas na cromatografia

8) tampão dos PIPES

Intervalo de pH adequado: 6,1 - 7.5

PKA (25°C): 6.76

Peso molecular: 302,37 g/mol

Utilizado como amortecedor na cromatografia por troca catiónica, deve ser utilizado em concentrações mais baixas devido à sua elevada resistência iónica e dependência da concentração em relação ao pKa.E um amortecedor na cromatografia de fosfocelulose para purificar proteínas de microtúbulos

9) tampão TAPS

Intervalo de pH adequado: 7,7 - 9.1

PKA (25°C): 8.40

Peso molecular: 243,28 g/mol

Utilizado como amortecedor na cromatografia planar para separação de corantes e na cromatografia de troca de íons para purificação enzimática14

10) tampão Tris

Faixa de pH adequada: 7,5 - 9.0

PKA (25°C): 8.06

Peso molecular: 121,14 g/mol

Utilizado como tampão e eluente na cromatografia de troca de aniões e na electrocromatografia capilar devido à sua baixa mobilidade iônica

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