Nos campos da química e da bioquímica,A tecnologia de rotulagem por fluorescência é uma ferramenta amplamente utilizada que permite aos pesquisadores rastrear e analisar biomoléculas detectando sinais de fluorescência específicosEntre eles,Ester de acridínio, como marcador fluorescente comumente utilizado, tem boas propriedades químicas e é amplamente utilizado na tecnologia de detecção biológica e de imagem.O processo de luminescência do éster de acridina envolve o uso de solução de pré-excitação e solução de excitação.Este artigo irá explorar em detalhe os seus princípios químicos e as suas aplicações na detecção de fluorescência.
1、 Solução de pré-excitação: solução de peróxido de hidrogénio
A solução de pré-excitação desempenha um papel crucial no processo de luminescência do éster de acridina.O peróxido de hidrogênio é um oxidante comumente usado, que contém dois átomos de oxigênio em sua estrutura molecular. Um átomo de oxigênio forma uma ligação covalente com os outros dois átomos de hidrogênio, enquanto o outro átomo de oxigênio existe em uma única forma de elétron,produzindo peróxido de hidrogénio altamente oxidante.
Na reação de luminescência do éster de acridina, o peróxido de hidrogênio atua como oxidante e pode reagir com os grupos redutores na molécula de éster de acridina,desencadeando assim a geração de sinais de fluorescênciaEste processo de reação é comumente referido como "chemiluminescência" ou "excitação química".o único elétron na molécula de peróxido de hidrogênio sofre transferência de elétrons com o grupo redutor na molécula de éster de acridinaQuando o estado excitado da molécula de éster de acridina retorna ao estado fundamental, a molécula de acridina é transformada em um ester de acridina.A energia é liberada e manifesta-se na forma de fótons., que é o que chamamos de sinal de fluorescência.
A concentração e a pureza da solução de peróxido de hidrogénio têm um impacto significativo na eficácia da detecção por fluorescência.ativando efetivamente a molécula de éster de acridinaO peróxido de hidrogénio de alta pureza pode reduzir a interferência de impurezas nos sinais de fluorescência, melhorar a sensibilidade e precisão da detecção.
2Solução excitante: solução de hidróxido de sódio
A solução de excitação também desempenha um papel importante no processo de luminescência dos ésteres de acridina.O hidróxido de sódio é uma base forte com uma estrutura molecular contendo íons hidróxido (OH −), que confere às soluções de hidróxido de sódio uma elevada alcalinidade.
Na reação de luminescência do éster de acridina, a solução de hidróxido de sódio desempenha principalmente um papel na regulação do valor de pH do sistema de reação.A intensidade e a estabilidade dos sinais de fluorescência são influenciados pelo valor de pH do sistema de reaçãoPor conseguinte, adicionando uma quantidade adequada de solução de hidróxido de sódio,O valor de pH do sistema de reação pode ser ajustado para estar na faixa ideal que conduz à geração de sinais de fluorescênciaAlém disso, a solução de hidróxido de sódio também pode promover a reação entre as moléculas de peróxido de hidrogênio e éster de acridina.,Este efeito promotor ajuda a acelerar a geração de sinais de fluorescência e a melhorar a eficiência da detecção.
3、 O efeito sinérgico da solução de pré-excitação e da solução de excitação
Em aplicações práticas, the synergistic effect of pre excitation solution (hydrogen peroxide solution) and excitation solution (sodium hydroxide solution) is the key to the successful chemiluminescence reaction of acridine esterO peróxido de hidrogênio, como oxidante, fornece a energia necessária para excitar o éster de acridona, promovendo as moléculas de éster de acridona a entrar no estado excitado.O ambiente alcalino criado pelo hidróxido de sódio não só otimiza este processo de oxidação, mas também promove a reação entre o éster de acridona e o peróxido de hidrogénio, garantindo a eficiência e estabilidade da reação.
1. regulação do pH: o hidróxido de sódio não só participa directamente na promoção da reacção de oxidação do peróxido de hidrogénio, ajustando o pH do sistema à alcalinidade,mas também estabiliza o intermediário excitado do éster de acridinaUm valor de pH adequado pode maximizar a eficiência da luminescência, ao mesmo tempo em que reduz a ocorrência de reacções secundárias,Manutenção da pureza e intensidade do sinal.
2. Velocidade e eficiência da reação: em condições alcalinas, a capacidade de oxidação do peróxido de hidrogénio é aumentada e a velocidade de reação com o éster de acridina é acelerada,que reduz o período de indução da reação de luminescência, permitindo que o sinal de luminescência seja rapidamente gerado e detectado em tempo hábil.
3Força e estabilidade do sinal: ajustando finamente a razão e a concentração da solução de pré-excitação e da solução de excitação,a intensidade e a duração do sinal de luminescência podem ser otimizadasPor exemplo, uma elevada concentração de peróxido de hidrogénio pode fazer com que o sinal atinja rapidamente o seu pico e, em seguida, decaia rapidamente,enquanto uma baixa concentração pode não ser suficiente para excitar efetivamente a luminescênciaA concentração de hidróxido de sódio deve equilibrar a otimização do pH e evitar possíveis danos às amostras biológicas.
4. Área de aplicação: Devido às suas propriedades de quimioluminescência direta, a tecnologia de rotulagem do éster de acridina combinada com soluções de pré-excitação e excitação é amplamente utilizada no diagnóstico clínico,investigação biológica, testes de segurança alimentar e outros campos, como análise imunológica, detecção de hibridação de ácidos nucleicos, especialmente em tecnologias de detecção em tempo real que exigem alta sensibilidade e detecção rápida.
Em resumo, a proporção adequada e a utilização da solução de pré-excitação e da solução de excitação são cruciais para alcançar a otimização da reação de quimioluminescência do éster de acridina.Eles garantem a eficiência, estabilidade e fiabilidade da reação de luminescência, fornecendo ferramentas poderosas para pesquisa científica e detecção clínica.
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