Como escolher o amortecedor biológico apropriado

Escolher o certoBiológicoReservatórioA partir daí, o experimento pode ser uma tarefa difícil. Existem muitas opções disponíveis (Hepes, Mops, Tris, Bis-Tris, etc.), que podem facilmente causar confusão.

Após compreender estes desafios, Desheng preparou uma pequena lista para sua referência ao escolherReservatóriosais para investigação:

1Intervalo de amortecimento

Cada reagente tampão tem um intervalo de pH com o mais forteReservatórioEsta capacidade de amortecimento é geralmente determinada pela pKa doReservatórioDeve escolher um amortecedor com um valor de pKa próximo do meio do intervalo desejado (normalmente, é recomendado utilizar umReservatóriocom um valor de pKa que se situe, pelo menos, dentro de uma unidade de pH do pH-alvo).

Intervalo de pH aplicável de cada tampão

2. Alterações do pH durante o experimento

Considerar antecipadamente se o valor do pH pode aumentar ou diminuir durante o experimento é fundamental para a selecção deReservatórios. Se você acha que o pH vai aumentar durante o experimento, você deve escolher um amortecedor com um pKa ligeiramente superior ao valor ideal no início do experimento.se você acha que o pH vai diminuir, escolha um tampão com um pKa mais baixo.

3. Concentração de tampão

A concentração do amortecedor deve ser ajustada de modo a ter uma capacidade de amortecimento suficiente para o sistema experimental.o pH da solução não pode ser estabilizadoPor outro lado, se a concentração for demasiado elevada, é provável que o amortecimento afecte o experimento.

Para sistemas em que a troca de protões de hidrogénio não é activa, recomenda-se geralmente uma concentração de 25-100 mM.ReservatórioUma concentração 20 vezes superior à concentração molar dos prótons trocados.

Quando se prepara umReservatóriosolução, lembre- se de ajustar a concentração da solução à concentração de utilização prevista.

4. Mudança de temperatura

O pH da solução tampão deve ser ajustado em função da temperatura a que se irá realizar o experimento.e, portanto, o pH e a capacidade de amortecimento do sistemaEsta situação pode ser crítica em sistemas biológicos, onde são necessárias concentrações precisas de íons hidrogénio para que o sistema de reação funcione com a máxima eficiência.

O pKa de alguns tampões (como o PIPES) é menos sensível às alterações de temperatura, mas outras opções (como o PIPES) são menos sensíveis às alterações de temperatura.TRIS, ACES, TAPS, TES ou Tricine) são mais afectados por estas alterações.

A figura a seguir mostra a variação aproximada de pKa em função da temperatura da Biobúfera Desheng:

Mudança aproximada de pKa da temperatura da biobúfera de Desheng

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