Escolher o amortecedor biológico direito para a experiência pode ser uma tarefa dificil. Há muitas opções disponíveis (Hepes, espanadores, Tris, Bis-Tris, etc.), que podem facilmente causar a confusão.
Após ter compreendido estes desafios, Desheng preparou uma lista de selecionados para sua referência ao escolher sais do amortecedor para a pesquisa:
1. Escala de amortecedor
Cada reagente do amortecedor tem uma escala do pH com a capacidade de amortecedor a mais forte. Esta capacidade de amortecedor é determinada geralmente pelo pKa do reagente do amortecedor. Você deve escolher um amortecedor com um valor do pKa perto do meio da escala desejada (tipicamente, se recomenda usar um amortecedor com um valor do pKa que esteja pelo menos dentro de uma unidade do pH do pH do alvo).
A escala aplicável do pH de cada amortecedor
2. mudanças de pH durante a experiência
Considerando adiantado se o valor de pH pode aumentar ou a diminuição durante a experiência é crítica à seleção dos amortecedores. Se você pensa o pH aumentará durante a experiência, você deve escolher um amortecedor com um pKa levemente mais alto do que o valor ótimo no início da experiência. O oposto é igualmente verdadeiro: se você pensa o pH diminuirá, escolhe um amortecedor com um pKa mais baixo.
3. Concentração do amortecedor
A concentração do amortecedor deve ser ajustada para ter a suficiente capacidade de proteção para o sistema experimental. Geralmente, se a concentração do amortecedor é demasiado baixa, o pH da solução não pode ser estabilizado. Inversamente, se a concentração é demasiado alta, o amortecedor é provável afetar a experiência. Geralmente, recomenda-se usar uma concentração mais altamente de 25mM.
Para os sistemas em que a troca de protão do hidrogênio não é ativa, uma concentração de 25-100mM é recomendada geralmente. Para os sistemas onde a troca de protão pode ocorrer, recomenda-se usar mais altamente uma concentração 20times do amortecedor do que a concentração de molar dos protão trocados.
Ao preparar uma solução de amortecedor, recorde ajustar a concentração da solução à concentração pretendida do uso.
4. Mudança de temperatura
Você deve ajustar o pH da solução de amortecedor de acordo com a temperatura em que a experiência será executada. A temperatura afeta diretamente o pKa do amortecedor, e assim a capacidade do pH e de proteção do sistema. Esta situação pode ser crítica nos sistemas biológicos, onde as concentrações de íon de hidrogênio exatas são exigidas para que o sistema de reação opere no máximo a eficiência.
O pKa de alguns amortecedores (tais como as TUBULAÇÕES) é menos sensível às mudanças de temperatura, mas às outras opções (tais como TRIS, ÁS, TORNEIRAS, TES, ou Tricine) é afetado mais por estas mudanças.
A figura abaixo mostra a mudança aproximada do pKa de acordo com a temperatura de Desheng Biobuffer:
Mudança aproximada do pKa da temperatura de Desheng Biobuffer
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