A cromatografia em coluna de celulose fosfatada, como uma das tecnologias essenciais no domínio da separação e purificação de moléculas biológicas,desempenha um papel importante na preparação de biomoléculas, tais como proteínas e ácidos nucleicos, devido ao seu desempenho eficiente de adsorção e separaçãoO princípio central desta tecnologia consiste em utilizar a ligação específica entre os grupos fosfatados na superfície do meio de celulose fosfatada e as biomoléculas.como as interações eletrostáticas e a ligação de hidrogénioNeste processo, a selecção e otimização do tampão afetam directamente o efeito da cromatografia, e o tampão MES,devido às suas propriedades físico-químicas únicas, tornou-se a escolha ideal para os passos de equilíbrio e de elução nesta tecnologia.
A aplicação primária deReservatório MES(2-morfolina etanosulfônico ácido tampão) na cromatografia de coluna de fosfocelulose é como uma solução de equilíbrio, proporcionando um ambiente inicial estável para o sistema de cromatografia.Antes de iniciar a operação de cromatografia, a large amount of equilibrium solution needs to flow through the chromatography column to achieve thermodynamic equilibrium between the stationary phase (cellulose phosphate medium) and the mobile phase (MES buffer)Os grupos fosfatados na superfície do meio de celulose fosfatada dissociar-se-ão em condições de pH específicas.e a faixa de pH tampão da solução tampão MES corresponde precisamente à faixa de pH de funcionamento ideal da celulose fosfatadaEsta estabilidade garante que a coluna esteja num estado inicial uniforme antes da carga da amostra,evitando efetivamente diferenças na eficiência de adsorção causadas por flutuações locais do pH, estabelecendo as bases para a repetibilidade e estabilidade da separação subsequente.As características extremamente baixas de absorção UV do tampão MES também reduzem a interferência com a detecção de molécula alvo.
Durante a fase de elução, o amortecedor MES consegue a separação por gradiente de biomoléculas, regulando com precisão a força iónica e o valor do pH.A força de ligação entre as biomoléculas e o meio de celulose fosfatada depende da atração eletrostática entre a carga superficial da molécula e os grupos fosfatados no meioEm experimentos, geralmente é utilizado um sistema misto de tampão MES e cloreto de sódio.Aumentando gradualmente a concentração de cloreto de sódio (i.e. aumentando a resistência iónica), os íons da solução competem com as biomoléculas para se ligarem aos locais carregados na superfície da fosfocelulose,de modo a enfraquecer a interação entre as biomoléculas e o meioDevido às diferenças nas propriedades carregadas e no peso molecular de diferentes biomoléculas, a sua força de ligação com o meio varia.serão elutados sucessivamente em soluções tampão MES com diferentes intensidades iônicas para obter a separação e purificação.
Além disso, o amortecedor MES tem uma elevada estabilidade química e não reage facilmente com biomoléculas durante a cromatografia,que podem efetivamente manter a estrutura natural e a atividade das biomoléculasO que é crucial para a investigação funcional ou aplicações posteriores.A sua boa solubilidade e baixa pressão osmótica também reduzem os danos à coluna de cromatografia e o potencial impacto nas biomoléculas.
Em resumo, MES buffer plays an irreplaceable key role in phosphocellulose column chromatography technology by serving as an equilibrium solution to ensure the initial stability of the chromatography system and as an eluent to achieve precise separation of biomolecules through ion strength regulationProporciona uma solução eficiente e fiável para a separação e purificação de biomoléculas.
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