Otimização do método das PARTES SUPERIORES para a determinação de ácidos gordos livres

A determinação dos ácidos graxos livres no soro ou no plasma é geralmente efectuada pelo método fotométrico da enzima cromogénica de Trinder.A detecção de ácidos graxos é afectada por muitos factores, e o método de detecção deve ser otimizado e melhorado para melhorar a precisão da detecção.

Princípio FFA de detecção de cromogénio do trindor:

O método de detecção tem três etapas de reacção: os ácidos graxos livres (FFA ou NEFA) reagem com o excesso de CoA para gerar acil-CoA sob a ação da acetil-CoA sintase (ACS),e reagem com oxigénio sob a ação da acetil-CoA oxidase (ACO)A reacção gera 2,3-trans-enoil CoA e peróxido de hidrogénio, sendo utilizada a reacção de Trinder para detectar o peróxido de hidrogénio, podendo ser obtido o teor de FFA.

Recomenda-se o TOPS para a determinação da FFA do cromogénio

Problemas nos métodos de determinação e otimização de FFA:

1O excesso de coenzima A na reacção irá interferir com a reacção do peróxido de hidrogénio e do cromogénio Trinder, tornando o resultado do teste baixo.A N-etilmaleimida (NEM) pode ser utilizada para remover o excesso de coenzima A.A estabilidade do NEM está muito afetada.

2A acetil CoA sintetase e a acetil CoA oxidase utilizadas têm diferentes especificidades de substrato para diferentes ácidos graxos livres, causando diferenças nos resultados de determinação.Diferentes fontes de enzimas têm diferentes especificidades de substrato para ácidos graxos livres com diferentes comprimentos de cadeia CExistem 6 tipos de FFA no soro humano, e apenas enzimas com alta especificidade para eles não podem fazer diferença nos resultados da medição.

3Devido à influência do CoA na reação, o intervalo linear dos resultados dos dados é estreito.E deve ser excessivo., então a interferência é necessária. Menos cromogênio. SCEP não é interferido pela coenzima A, mas é instável. ADOS e TOPS são menos interferidos pela CoA, e TOPS tem um maior coeficiente de absorção molar,Então é um melhor substrato cromogênico.

4. Adicione o complexo de sulfidrilo DTNB e MIT para reduzir a quantidade de NEM. O grupo de sulfidrilo do DTNM pode reagir com o grupo de sulfidrilo do CoA para remover a interferência ao cromogênio.Uma pequena quantidade de MIT pode remover o grupo sulfhydryl de CoA e também atua como um conservanteCom base na utilização do cromógeno TOPS, a interferência do CoA pode ser completamente eliminada e a estabilidade é muito melhorada.

Se tiver requisitos mais elevados para os resultados da determinação da FFA, pode escolher um kit de melhor qualidade com base nos pontos acima.A Desheng produz as matérias-primas para o FFA e outros kits de determinação de índicesSe o TOPS for utilizado para determinar directamente a FFA, devido à fraca estabilidade da solução, recomenda- se preparar uma solução de trabalho para utilização imediata antes da utilização.