Diversos fatores que devem ser considerados antes da reação da quimioluminescência

O ensaio da quimioluminescência está transformando-se cada vez mais popular devido a sua sensibilidade magnífica da detecção. De uso geral são o luminol, o isoluminol, e os ésteres da acridina. Na análise química, as reações da quimioluminescência são usadas para detectar os analytes diretamente etiquetados covalently com compostos da quimioluminescência. Provocar uma etiqueta quimiluminescente para uma reação luminescente gera um sinal para a detecção do analyte. A vantagem deste método é que é mais simples e mais claro, e evita a necessidade para maior, relativamente etiquetas “pegajosas”. Contudo, os fatores para selecionar a reação da detecção, se é uma etiqueta da enzima ou uma etiqueta direta, e como determinar a intensidade de luz devem ser considerados antes de projetar a reação.

Enzima que etiqueta ou que etiqueta direto? O método comum de gerar a quimioluminescência é usar enzimas etiquetadas para catalisar a reação da quimioluminescência. Cada etiqueta pode iniciar as reações múltiplas da quimioluminescência, tão geralmente somente uma ou alguns etiquetas/analytes da enzima precisam de ser incorporados. O composto quimiluminescente é superior fornecido como uma carcaça da enzima para assegurar a cinética da saturação. A intensidade de luz é uma função linear da quantidade de enzima etiquetada. A intensidade, a taxa da emissão de por segundo dos fotão, é o produto da conversão catalítica da carcaça e da vida do composto luminescente.

O gráfico da distribuição da intensidade/tempo da quimioluminescência inclui um período de aumentação inicial e o alargamento da luminescência até o platô ou o platô falso. Se não há nenhum valor estável do platô, indica que a carcaça está esgotada ou a enzima está neutralizada. A detecção de quimioluminescência produzida por enzimas fornece a grande flexibilidade no processo da medida. A intensidade de luz em qualquer momento a tempo que passa através do ponto culminante pode ser relacionada à quantidade de enzima. Se a velocidade é um tipo problema do único-ponto ou da inclinação do multi-ponto da medida, você pode medi-lo na divisória de ascensão a fim obter a sensibilidade a mais alta, contudo, não há muitos compostos quimiluminescentes apropriados. Os candidatos apropriados devem primeiramente ter determinadas funções para permitir a conexão com outras moléculas. Mais importante, uma vez que a etiqueta é provocada, deve emitir-se toda a luz no tempo possível o mais curto.

Quando a quimioluminescência é emitida gradualmente durante um período de tempo, as diminuições da intensidade do sinal (fotão/segundo), e são os melhores determinar o número ótimo de etiquetas da quimioluminescência na espécie a ser detectada baseada na experiência. Mesmo se teoricamente mais etiquetas devem fornecer mais fotão, se as etiquetas são espaçadas demasiado perto junto, um efeito extinguindo ocorrerá. A área de superfície e o número de grupos derivatizable (geralmente amino ou de grupos do mercapto) fornecem umas limitações mais adicionais. Na prática, até 10-20 etiquetas podem ser limitadas a uma macromolécula. Além, mais etiquetas na superfície da molécula obrigatória, mais provavelmente a etiqueta interferirá com suas propriedades obrigatórias.

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