Similaridades e diferenças entre Tris e Tris-HCl e Tris-EDTA

Tris: trimetilol aminometano

O trismetilaminometano (Tris) é um composto orgânico com a fórmula (HOCH 2) 3CNH 2.Base TrisOs tampões TAE e TBE (usados para dissolver ácidos nucleicos) utilizados em experimentos bioquímicos requerem Tris,que pode condensar com aldeídos quando contém grupos aminoCaracterísticas de amortecimento A Tris é uma base fraca.1De acordo com a teoria de amortecimento, a faixa de amortecimento eficaz do amortecimento Tris está entre pH 7,0 e 9.2.

O pH da solução aquosa da base Tris é de cerca de 10.5Geralmente, o ácido clorídrico é adicionado para ajustar o valor do pH ao valor desejado, e então a solução tampão com este valor de pH pode ser obtida.A influência da temperatura sobre o pKa de Tris deve ser controlada..

Uma vez que o tampão Tris é uma solução alcalina fraca, o ADN será desprotonado numa solução desse tipo, melhorando assim a sua solubilidade.As pessoas muitas vezes adicionam EDTA ao tampão de ácido clorídrico Tris para fazer "tampão TE"Se a solução ácida ajustada pelo pH for substituída por ácido acético, obtém-se um "tampão TAE" (Tris/Acetato/EDTA),e se for substituído por ácido bóricoEstes dois tampões são utilizados em experimentos de eletroforese de ácidos nucleicos.

1 M Tris-HCl (pH7).4, 7.6, 8.0)

Concentração do componente 1M Tris-HCl

Volume de preparação 1L

Método de preparação:

1Pesar 121,1 gramas de Tris num copo de 1 litro.

2Adicionar cerca de 800 ml de água desionizada e agitar para dissolver.

3Adicionar a quantidade de HCl concentrado conforme indicado na tabela abaixo para ajustar o valor de pH necessário.

pH HCl concentrado

7.4 cerca de 70 ml

7.6 cerca de 60 ml

8.0 cerca de 42 ml

4. Aumentar a solução para 1 L.

5. Após esterilização a alta temperatura e pressão, conservar à temperatura ambiente.

Nota: Antes de ajustar o valor do pH, deixar arrefecer a solução até à temperatura ambiente, uma vez que o valor do pH da solução Tris varia muito com a temperatura.Quando a temperatura aumenta 1°C, o valor do pH da solução diminui cerca de 0,03 unidades.

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

Concentração do componente 1,5 M Tris-HCl

Volume de preparação 1L

Método de preparação

1Pesamos 181,7g de Tris num copo de 1 litro.

2Adicionar cerca de 800 ml de água desionizada e agitar para dissolver.

3Ajuste o pH para 8,8 com HCl concentrado.

4. Aumentar a solução para 1 L.

5. Após esterilização a alta temperatura e pressão, conservar à temperatura ambiente.

Nota: A solução deve ser arrefecida até à temperatura ambiente antes de ajustar o valor do pH, uma vez que o valor do pH da solução Tris varia muito com a temperatura,

Para cada aumento de temperatura de 1°C, o pH da solução diminui aproximadamente 0,03 unidades.

As vantagens do tampão Tris-HCl são:

1Dado que a base Tris é mais alcalina, pode utilizar este sistema tampão para preparar uma solução tampão com uma ampla gama de valores de pH, de ácido a alcalino;

2 Pouca interferência no processo bioquímico, sem precipitação com íons de cálcio, magnésio e íons de metais pesados.

As desvantagens são:

1 O valor do pH da solução tampão é muito afectado pela concentração da solução, a solução tampão é diluída dez vezes e a variação do valor do pH é superior a 0.1;

2O efeito da temperatura é grande e a variação da temperatura tem uma grande influência no valor de pH da solução tampão, nomeadamente:031, por exemplo: o pH da solução tampão a 4°C=8.4, então o valor do pH a 37°C= 7.4, deve ser preparado à temperatura de utilização, o tampão Tris-HCl preparado à temperatura ambiente não pode ser utilizado a 0 °C ~ 4 °C.

3 O CO2 é facilmente absorvido pelo ar, pelo que o tampão preparado deve ser bem fechado.

Esta solução tampão irá interferir com certos eletrodos de pH, por isso utilize um eletrodo compatível com a solução Tris.

A solução de Tris pode absorver dióxido de carbono do ar, preste atenção à vedação durante o armazenamento, se você precisar de esterilidade, você pode adicionar azeto de sódio.

TE é o tampão Tris-EDTA (10mM Tris, 1mM EDTA, pH7,4 pH7,6 pH8,0).

Reagentes de biologia molecular comumente utilizados para dissolução de ADN.

Preparar tampão 10×TE (pH7).4, 7.6, 8.0)

Concentração do componente: 100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

Volume de preparação: 1L

Método de preparação:

1Medir a seguinte solução e colocar num copo de 1 L.

1M Tris-HCl tampão (pH7.4, 7.6, 8.0) 100 ml

500 mM EDTA (pH8.0) 20 ml

2Adicionar aproximadamente 800 ml de água desionizada ao copo e misturar uniformemente.

3Após ajustar o volume para 1 L, esterilizar a alta temperatura e pressão.

4- Armazenar à temperatura ambiente.