O HEPES (4- ((2-Hydroxyethyl)-1-piperazine-etanosulfônico) é um amortecedor zwitteriónico, n.o CAS 7365-45-9,Este amortecedor é geralmente usado em experimentos bioquímicos para ajustar o pH do sistema de reaçãoA solução não é tóxica para as células e mantém o pH por um longo tempo.
Reservatório HEPESÉ um amortecedor anfóterico não iónico com boa capacidade de amortecimento na gama de pH 7,2-7.4A sua principal característica é a manutenção de um valor de pH relativamente estável no meio de cultura ou na observação celular.As tampas dos frascos de cultura celular devem ser apertadas com força para evitar que o carbonato necessário escape para o ar..
A forma de preparar o tampão HEPES.
O tampão de Hepes pode ser adicionado directamente ao meio de cultura preparado com a concentração necessária, seguido de esterilização por filtro. Adicionar 2,38 gramas de pó de Hepes a cada 1000 ml de solução de cultura,ajustar o pH para 7.2 com 1NNaOH após dissolução, filtrar e esterilizar antes da aplicação, nesta altura, a concentração de HEPES é de 10 mmol/L.
Adicionando 99 ml de solvente de meio de cultura celular em 1 ml de solução básica, a concentração de HEPES é também de 10 mol/L. Abaixo está a forma de preparar a solução básica de HEPES com 1 mol/L. Primeiro, dissolvendo 23.8 g de HEPES em 90 ml de água duplamente destiladaEm segundo lugar, ajustar o pH para 7,5-8,0 com 1N NaOH; Em terceiro lugar, fazer até 100 ml com titrante de água; Em seguida, filtrar e esterilizar antes de embalar em frasco de 2 ml; Por último, armazenar a 4°C ou -20°C.
Com resistência a altas temperaturas e ponto de fusão até 200°C, o pó HEPES não será degradado por autoclave.se a solução aquosa de HEPES for exposta à luz ambiente durante três horas, o peróxido de hidrogénio tóxico (H2O2) será gerado.uma é que a solução aquosa de HEPES deve ser mantida longe da luz para não afetar os resultados experimentaisApós ser configurado como solvente, deve ser armazenado a 4 °C e utilizado num curto período de tempo para obter melhores resultados.Outro é geralmente colocado em uma sala seca e não pode ser exposto diretamente à luz solar por muito tempo.
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