A purificação de proteínas é um passo crucial na investigação biofarmacêutica e nas ciências da vida, e aSubstrato cromogénicoO ADOS fornece um apoio importante para a eficiência e precisão do processo de purificação devido às suas propriedades únicas.Este artigo analisa as principais vantagens do ADOS na purificação de proteínas de uma perspectiva de aplicação prática.
Alta sensibilidade: identificação precisa de proteínas de baixa abundância
O ADOS pode converter quantidades de proteínas-alvo em sinais de cor visíveis através de reações específicas com enzimas marcadoras como a peroxidase do rabanete.Mesmo em concentrações de proteínas tão baixas como nanogramasPor exemplo, na cromatografia de afinidade, o ADOS pode monitorar a concentração de proteína no eluente em tempo real,ajudar os pesquisadores a determinar com precisão a posição do pico de elução e evitar a perda de amostra causada por sinais fracosEsta vantagem de sensibilidade melhora significativamente a taxa de recuperação de proteínas de baixa abundância, tais como proteínas de membrana ou anticorpos raros.
Forte capacidade anti-interferência: adaptável a ambientes experimentais complexos
As amostras de purificação de proteínas geralmente contêm detergentes, ureia ou altas concentrações de íons de sal, que podem interferir com os substratos de cor tradicionais e levar a falsos positivos ou deriva de sinal.O ADOS aumenta a estabilidade através de grupos de ácido sulfónico na sua estrutura molecular e tem um desempenho excepcional nos seguintes cenários::
1Resistência aos detergentes: na presença de 1% de Tritão X-100 ou SDS, a flutuação do fundo de cor é inferior a 5%;
2. Ampla adaptabilidade ao pH: adequado para sistemas tampão com pH 6,5-8.5, abrangendo a maioria dos requisitos dos processos cromatográficos;
3Resposta rápida: o desenvolvimento da cor é concluído em 5 minutos, reduzindo a janela de tempo para as impurezas interferirem.
Esta característica permite-lhe ser utilizado diretamente para a detecção de extrato bruto, simplificando as etapas de pré-processamento.
Fácil de operar: melhorar a eficiência experimental
O projeto do ADOS enfatiza a praticidade e otimiza significativamente o processo operacional;
2- Visualização dos resultados: determinação intuitiva da concentração de proteínas através da profundidade de cor, reduzindo a dependência de instrumentos de precisão;
3Estabilidade a longo prazo: a vida útil pode durar até 24 meses quando armazenada a 4 °C.
Estas características são particularmente adequadas para cenários de triagem de elevado rendimento ou produção industrial, reduzindo o ciclo de purificação em cerca de 30%.
Aplicação de vários cenários: abrangendo todos os requisitos do processo
A aplicação do ADOS passa por vários estágios de purificação de proteínas:
1Monitorização do processo de cromatografia: rastreamento em tempo real das curvas de elução de proteínas alvo e otimização dos intervalos de recolha;
2Verificação da pureza: em combinação com a eletroforese ou a análise de espectrometria de massa, avaliar rapidamente as impurezas residuais no produto purificado;
3- Assistência ao desenvolvimento de processos: através da comparação da intensidade de cor de diferentes esquemas de purificação, são selecionadas as condições ideais.
Por exemplo, na produção de anticorpos monoclonais, o ADOS pode detectar simultaneamente títulos de anticorpos e resíduos de proteína hospedeira, alcançando um duplo controle de qualidade.
Resumo
O ADOS, um substrato cromogénico, tornou-se uma ferramenta importante no campo da purificação de proteínas devido às suas principais vantagens de alta sensibilidade, forte capacidade anti-interferência,e operação conveniente- não só melhora a precisão da recuperação da proteína alvo, mas também reduz o limiar técnico, simplificando o processo,fornecer uma solução eficiente e económica para a investigação e produção biofarmacêuticasNo futuro, com a popularização dos equipamentos de purificação automática,O ADOS deverá continuar a integrar-se com sistemas de monitorização inteligentes para promover o desenvolvimento da tecnologia de purificação de proteínas para uma maior precisão e menor custo..
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