Nos campos da bioquímica e da biologia molecular, a detecção da actividade enzimática é um dos meios importantes para compreender processos bioquímicos complexos em organismos,avaliar os estados fisiológicosCom o progresso contínuo da ciência e da tecnologia, foram desenvolvidos métodos de detecção cada vez mais eficientes e sensíveis.HDAOSreagente (N-etil-N - (2-hidroxi-3-sulfopropilo) -3,5-dimetoxianilina sal de sódio), como novo reagente colorimétrico, demonstrou vantagens únicas na detecção da actividade enzimática.Este artigo aprofundará a aplicação do HDAOS na detecção da atividade enzimática, analisar os seus princípios, vantagens e perspectivas futuras.
1、 Características e princípios básicos do HDAOS
O HDAOS é um derivado altamente solúvel em água da anilina, cujas características estruturais lhe conferem uma excelente estabilidade e sensibilidade.HDAOS é geralmente usado como um substrato cromogênico ou indicador para participar da reaçãoO princípio básico é que, na presença de peróxido de hidrogénio (H 2 O 2) ou de outros oxidantes, o HDAOS pode sofrer reacções de oxidação para produzir produtos coloridos.Esta mudança de cor é diretamente proporcional à quantidade de peróxido de hidrogênio ou outros produtos de oxidação produzidos em reacções catalisadas por enzimas, que reflete indiretamente o nível de actividade enzimática.
A aplicação específica do HDAOS na detecção da actividade enzimática
1Detecção da actividade da catalase
A catalase (CAT) é uma importante enzima antioxidante em organismos vivos que cataliza a decomposição do peróxido de hidrogênio em água e oxigênio, protegendo assim as células contra danos oxidativos.Na detecção da atividade da catalase, o HDAOS atua como um substrato cromogênico e reage com peróxido de hidrogênio sob a catálise da peroxidase (como a peroxidase HRP do rabanete) para gerar corantes roxos ou azuis estáveis.Medição da absorção do produto da reação, a concentração de peróxido de hidrogénio pode ser calculada para avaliar a atividade da catalase.
2Detecção indirecta de outras atividades enzimáticas
Além de detectar directamente a actividade da catalase, HDAOS can also be combined with other enzyme systems to indirectly evaluate the activity of related enzymes by monitoring changes in hydrogen peroxide or other oxidation products produced during the reaction processPor exemplo, no sistema da glucose oxidase (GOD), a glicose é oxidada em ácido glucônico sob a catálise de GOD, produzindo peróxido de hidrogênio.Peróxido de hidrogénio reage com HDAOS sob catálise de HRP para produzir produtos coloridosMedição da absorção do produto permite calcular a concentração de glicose, refletindo indiretamente a actividade do GOD.Este método tem uma ampla perspectiva de aplicação no diagnóstico da diabetes, monitorização da glicose no sangue e outros domínios.
As vantagens do HDAOS na detecção da actividade enzimática
1. Alta sensibilidade
O HDAOS tem uma taxa de reação rápida com oxidantes como o peróxido de hidrogénio e pode formar reações de cor estáveis em um curto período de tempo, o que o torna altamente sensível na detecção da atividade enzimática.Mesmo que a actividade enzimática seja baixa, resultados precisos podem ser obtidos através de medições precisas.
2Forte estabilidade.
O HDAOS apresenta uma boa estabilidade durante o armazenamento e a utilização e não é facilmente oxidado ou decomposto, garantindo a precisão e a fiabilidade dos resultados de detecção.A sua alta solubilidade em água também o torna uniformemente distribuído na solução, melhorando a eficiência da reação.
3Boa selectividade
O HDAOS tem uma elevada seletividade em relação a oxidantes como o peróxido de hidrogénio e pode determinar com precisão as suas concentrações em amostras complexas, evitando interferências de outras substâncias.Isto melhora a especificidade e precisão da detecção.
4Fácil de operar.
O método de detecção da atividade enzimática baseado no HDAOS é geralmente fácil de operar, rápido e não requer etapas complexas de pré-tratamento de amostras ou equipamentos de instrumentos caros.Isso o torna adequado para aplicação generalizada em pesquisa de laboratório e diagnóstico clínico.
Resumo
Em resumo, o HDAOS, como novo reagente colorimétrico, demonstrou vantagens únicas e aplicações potenciais na detecção da atividade enzimática.Com o progresso contínuo da ciência e da tecnologia e a expansão dos campos de aplicação, desempenhará um papel cada vez mais importante na investigação das ciências da vida e no diagnóstico clínico.
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