Os ácidos graxos livres (ACF), como o principal produto intermediário do metabolismo energético humano, os seus níveis anormais estão estreitamente relacionados com a diabetes, obesidade, doenças cardiovasculares e síndrome metabólica.A medição precisa e rápida da concentração de FFA não é apenas um indicador chave para o diagnóstico clínicoO substrato colorimétrico é um dos métodos de detecção mais utilizados para o diagnóstico da doença.TOPSO método fotométrico enzimático tornou-se gradualmente a tecnologia dominante para a determinação de FFA devido à sua alta sensibilidade, forte estabilidade e operação conveniente.
Princípio técnico: combinação perfeita de reacção enzimática e reacção colorimétrica
O núcleo da fotometria enzimática TOPS é vincular o processo de oxidação enzimática do FFA com a reação colorimétrica e analisá-lo quantitativamente por meio do método colorimétrico.O processo de detecção é dividido em duas etapas:
1. Estágio de oxidação enzimática: o FFA na amostra é catalisado pela acetil CoA sintase para se ligar com ATP e CoA para gerar acetil CoA, enquanto libera pirofosfato;A acetil CoA oxidase oxida ainda mais o acetil CoA para produzir peróxido de hidrogênio (H 2 O 2).
2Fase de reação de cor: sob a catálise da peroxidase (HRP),H 2 O 2 sofre reação redox com o substrato de cor TOPS e 4-aminoantipirina (4-AAP) para gerar compostos iminos quinona vermelha estáveisA profundidade de cor do composto está linearmente relacionada com a concentração de FFA,e o teor de FFA pode ser calculado com precisão através da medição da absorvência com um espectrofotômetro (geralmente a um comprimento de onda de 550-570 nm).
Vantagens técnicas: sensibilidade, estabilidade, facilidade de utilização
Em comparação com os métodos tradicionais, a fotometria enzimática TOPS apresenta vantagens significativas:
1. Alta sensibilidade: o TOPS tem uma absorção molar muito mais elevada do que os reagentes coloridos tradicionais (como os reagentes de cobre), e pode detectar FFA tão baixo quanto μ mol/L.É particularmente adequado para a análise precisa de amostras de baixa concentração, tais como soro.
2. Forte estabilidade: o TOPS tem propriedades químicas estáveis e não é facilmente afectado por temperaturas, flutuações de pH ou interferências da matriz da amostra,assegurar a repetibilidade e a fiabilidade dos resultados da detecçãoAlém disso, o formato do kit (sistema de reagente duplo) simplifica ainda mais o processo de operação e reduz os erros humanos.
3. Operação conveniente: não são necessárias etapas de pré-processamento complexas (como extracção orgânica ou derivatização).e a detecção pode ser concluída em 10-15 minutos, reduzindo consideravelmente o tempo de detecção.
4. Alta relação custo-eficácia: em comparação com a cromatografia a gás ou a cromatografia a líquido, a fotometria de enzimas TOPS não requer instrumentos e equipamentos caros, tem baixo consumo de reagente,e é adequado para promoção em larga escala em laboratórios clínicos.
Aplicação clínica: do diagnóstico da doença à gestão da saúde
Os cenários de aplicação da fotometria enzimática TOPS são amplos, cobrindo múltiplos campos como diagnóstico clínico, pesquisa metabólica e desenvolvimento de medicamentos
1Avaliação do risco de doenças cardiovasculares: o aumento do nível de FFA é um fator de risco independente para aterosclerose e isquemia do miocárdio.A detecção regular pode ajudar no diagnóstico precoce e no acompanhamento do prognóstico.
2. Gestão de doenças metabólicas: os doentes com diabetes são frequentemente acompanhados de distúrbios metabólicos da FFA.A monitorização dinâmica da concentração de FFA pode otimizar os programas de tratamento com insulina e controlar as flutuações do açúcar no sangue.
Conclusão: O método de fotometria enzimática TOPS, baseado em princípios científicos inovadores e implementação técnica prática, fornece uma solução eficiente e precisa para a detecção de FFA.Do diagnóstico clínico à gestão da saúde, da investigação básica ao desenvolvimento de medicamentos, esta tecnologia está a conduzir continuamente o progresso da medicina metabólica e a salvaguardar a saúde humana.
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