Há dois tipos de meios do transporte do vírus adicionados no tubo de amostra do vírus, um é a solução neutralizada da preservação do ácido nucleico alterado da extração lytic da proteína do vírus, e a outro é a manutenção da atividade do vírus in vitro, seu ácido nucleico e o antígeno alterado baseado no transporte médio termina a solução não-neutralizada da preservação. Para soluções neutralizadas da preservação, é importante neutralizar eficientemente vírus e impedir a infecção secundária.
Diferente do tipo não-neutralizado, o meio neutralizado do transporte do vírus é adicionado com uma concentração alta de sal do lysis, que possa neutralizar o vírus eficientemente e possa eficazmente impedir o operador da infecção secundária. Mas igualmente contém os inibidores do Rnase, que podem proteger o ácido nucleico viral da degradação, de modo que possam subseqüentemente ser detectados por NT-PCR. O efeito da inativação é verificado experimentalmente abaixo.
1. Materiais da verificação da inativação
1 embrião da galinha do SPF (e chocado a 10 dias velho por si só)
2 tensão infecciosa do vírus IBV QXL87 da bronquite da galinha
3 salinos normais (0,9% NaCl), esterilizado
4 soluções neutralizadas do armazenamento da amostra, 3 grupos.
5 jogos da extração do RNA
O meio do transporte do vírus neutraliza vírus
2. Métodos experimentais
1. Adicione a tensão infecciosa preparada do vírus QXL87 da bronquite da galinha à solução da preservação, de acordo com a relação de 1 (solução viral): 10 (solução da preservação), e ajustaram a temperatura ambiente em 18-26℃ para 45min. O líquido do vírus foi inoculado em embriões da galinha do SPF, e o líquido allantoic foi colhido.
2. Inocule o líquido allantoic colhido em 1 em 10 embriões velhos da galinha do SPF dos dias de acordo com o método allantoic da inoculação da cavidade. Cada amostra é inoculada com os 10 embriões da galinha, 0,1 mL/piece, colocada em uma incubadora 37°C para 144 h e rejeitada. Após 24 h de embriões inoperantes da galinha, observe e grave 24-44 h de mortes do embrião da galinha e do número de embriões vivos doentes após a inoculação. Observação de lesões do embrião da galinha, e a detecção do vírus infeccioso da bronquite da galinha de ácido nucleico no líquido allantoic colhido, referindo a tecnologia diagnóstica da bronquite infecciosa da galinha de GB/T 23197-2008, usando o jogo da extração do RNA para extrair o RNA, e usando o tempo real de uma etapa RT-qPCR do método para a detecção do vírus.
Agrupe 1/2/3 de vírus adicionado (100ul) + a solução da preservação (900ul); O grupo 4 adicionou o vírus (100ul) + salino fisiológico (900ul); Solução adicionada da preservação do grupo 5/6/7 (1000ul). Entre eles, o meio do transporte do vírus está em três grupos.
3. Resultados experimentais
De acordo com os resultados experimentais acima, os grupos 1, 2 e 3 foram inoculados com preservativos decontenção, que mostraram que os embriões da galinha cresceram normalmente; o grupo 4 foi inoculado com as lesões fisiológicos vírus-adicionadas salinas, e da galinha do embrião; os grupos 5, 6, e 7 foram inoculados com os preservativos, não mostrando nenhuma inibição de crescimento do embrião da galinha. Isto indica que a solução neutralizada da preservação pode neutralizar vírus.
Com esta experiência, nós podemos finalmente mostrar que os três grupos de amostra aleatória de Desheng neutralizaram a solução da preservação podem eficazmente neutralizar o vírus, e não tem nenhum efeito inibitório na função fisiológico normal das pilhas. Consequentemente, este meio neutralizado do transporte do vírus pode eficientemente neutralizar vários vírus e extrair ácidos nucleicos, que é apropriado para experiências da detecção do ácido RT-qPCR nucleico. Naturalmente, em virtude dos testes mais rápidos, que são usados diretamente para a detecção de pacientes diagnosticou com coroa nova, poucas empresas em China fará assim, porque apesar de tudo, o vírus novo da coroa não é tão fácil de obter!
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