Qual é o valor de pH adequado para o HEPES cultivar células 293T?

Na biologia celular e pesquisa de biologia molecular, as células 293T, como uma linha de células renais embrionárias humanas transformadas,tornaram-se um sistema modelo popular na investigação científica devido à sua fácil transfecção e boa expressão de genes exógenosPara que estas células possam crescer de forma saudável e manter as suas características biológicas, é crucial um controlo preciso das condições de cultura, sendo uma das bases a estabilidade do pH.Reservatório HEPES(4- (2- hidroxietilo) -1- piperazineetanosulfónico) desempenha um papel insubstituível como um bom amortecedor na manutenção da estabilidade do pH nos meios de cultura celular.Este artigo irá aprofundar a faixa de pH apropriada do HEPES e as suas estratégias de aplicação na cultura celular quando se cultivam células 293T.

O papel e a importância do HEPES

O HEPES é um excelente agente de amortecimento orgânico capaz de manter a estabilidade do pH das soluções numa ampla gama de pH (geralmente entre 6,8 e 8,2).Não interfere na maioria das reações bioquímicas e não forma complexos estáveis com íons metálicosPara as células 293T, a adição de HEPES ajuda a reduzir as flutuações de pH causadas pela atividade metabólica,assegurar que as células estão num ambiente de crescimento adequado.

Ambiente de pH ideal para células 293T

Embora o HEPES tenha uma ampla capacidade de amortecimento, a fixação do pH do meio de cultura para as células 293T ainda precisa de ter em conta as preferências fisiológicas das células.A investigação mostrou que a linha celular 293 (incluindo 293T) prefere um ambiente ligeiramente ácidoNo entanto, na aplicação prática, tendo em conta o efeito tampão do HEPES e a universalidade dos meios de cultura celular, o HEPES não pode ser utilizado em culturas de células.é geralmente recomendado ajustar o valor do pH do meio de cultura entre 7.0 e 7.2Isto não só satisfaz a preferência das células por um ambiente ligeiramente ácido, mas também garante a eficácia do sistema tampão HEPES,evitar a inibição do crescimento celular ou anormalidades morfológicas causadas pela alcalinidade.

Estratégias de ajustamento na prática

1. A quantidade de HEPES adicionada: De acordo com os requisitos experimentais,A adição de uma quantidade adequada de HEPES pode amortecer eficazmente as substâncias ácidas produzidas pelo metabolismo celular durante a cultura celular e manter a estabilidade do pH.

2. Utilizando NaHCO3 para ajustar o pH: Embora o HEPES seja o principal componente tampão, a adição de NaHCO3 ao meio de cultura também é necessária para ajustar preliminarmente o valor do pH à faixa alvo.Deve notar-se que as diferenças de pureza e de fabrico do NaHCO3 de diferentes lotes podem provocar ligeiras alterações no valor do pH.Por conseguinte, ao utilizar um novo lote de NaHCO3, deve ser calibrado um medidor de pH para assegurar que o pH do meio de cultura se situa entre 7 e 7.2.

3Monitorização e ajuste regulares: Durante o processo de cultura celular, o valor de pH do meio de cultura deve ser regularmente monitorizado e ajustado conforme necessário.Embora o HEPES forneça uma forte capacidade de amortecimento, a cultura celular prolongada ou a cultura celular de alta densidade podem causar uma variação gradual do pH.A substituição oportuna do meio de cultura fresco ou a adição adequada de tampão HEPES é a chave para manter um bom estado de cultura..

4- Ajuste personalizado: as condições experimentais em diferentes laboratórios (concentração de dióxido de carbono, temperatura, etc.)) e o número de passagens celulares podem afectar a sensibilidade das células ao pH., por isso é essencial fazer ajustes personalizados de acordo com a situação real, seguindo princípios básicos.

Em resumo, compreender e controlar a faixa de pH apropriada do HEPES é um passo fundamental e importante para nutrir as células 293T. Ao alocar adequadamente o uso do HEPES e do NaHCO3,combinado com a monitorização e o ajustamento regulares, um ambiente de crescimento próximo do estado ideal pode ser criado para as células 293T, melhorando assim a confiabilidade do experimento e reduzindo a reprodutibilidade.A cultura celular é tanto uma ciência como uma arte., e ajustes sutis podem muitas vezes conduzir a melhorias significativas nos resultados experimentais.Agentes de amortecimento biológicos, Desheng pode fornecer matérias-primas com 99% de pureza para os fabricantes para preparar e usar, que é conveniente, simples, e tem desempenho de amortecimento estável.Por favor, sinta-se à vontade para perguntar por detalhes.!