O nome completo de HEPES é ácido ethanesulfonic do hydroxyethylpiperazine 4, CAS é 7365-45-9, HEPES é usado frequentemente em amortecedores biológicos, escala de amortecedor do pH: 6.8-8.2, o componente principal do amortecedor dos hepes são ácido sulfúrico do etilo do hydroxyethylpiperazine, HEPES é um amortecedor amphoteric, que seja solúvel na água e não forme complexos estáveis com íons do metal. Tem uma boa capacidade de proteção na escala do pH de 7.2-7.4. É usado na maior parte em jogos diagnósticos bioquímicos dos jogos, da extração de DNA/RNA e em jogos diagnósticos do PCR.
Usado em uma variedade de reações bioquímicas:
1. O amortecedor de HEPES é usado frequentemente como um reagente do amortecedor no meio de cultura celular de vários tipos de organismos, adesão da pilha-pilha, agregação e cultura a curto prazo de pilha, e amortecedor para tecidos e pilhas de limpeza;
2. Na pesquisa da proteína, as TUBULAÇÕES são usadas frequentemente como o componente e o eluente do amortecedor obrigatório na cromatografia da troca de cation;
3. Na pesquisa do ADN, as TUBULAÇÕES são usadas como um amortecedor para o fosfato de cálcio e o ADN precipita o sistema da formação, e como um amortecedor para o AFM e as experiências do electroporation.
4. Além, HEPES tem alguma interferência à reação entre o ADN e as enzimas da limitação, e não é apropriado para o método de Lowry determinar o índice de proteína.
5. O amortecedor de HEPES é usado frequentemente na pesquisa dos organelles e proteínas e enzimas altamente variáveis, pH-sensíveis, assim como jogos diagnósticos bioquímicos, de extração de DNA/RNA jogos e jogos diagnósticos do PCR.
6. O amortecedor da reação, amortecedor da pre-hibridação, e amortecedor da hibridação para separar e analisar componentes nucleares do RNA; usado para o RNA e o T4RNA. A categoria da biologia molecular é usada para etiquetar o 3' - extremidade do RNA com a ligase do RNA T4, para separar e analisar os componentes do amortecedor da reação, o amortecedor da pre-hibridação e o amortecedor da hibridação do RNA nuclear.
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1. O pH exigido para a maioria de pilhas é 7.2-7.4, mas o pH apropriado para a cultura celular varia com os tipos de pilhas que estão sendo cultivadas. Os fibroblasto preferem um pH mais alto (7.4-7.7), quando a passagem de linha celular transformadas exigir a acidez. pH (7.0-7.4). Desde que a maioria de líquidos da cultura são protegidos pelo sistema do bicarbonato de sódio (NaHCO3) e do CO2, a concentração do CO2 na fase de gás deve estar no equilíbrio com a concentração do bicarbonato de sódio no líquido da cultura. Se a concentração do CO2 na fase de gás ou no ar da incubadora é ajustada em 5%, a quantidade de NaHCO3 adicionou na solução da cultura é 1.97g/L; se a concentração do CO2 é mantida em 10%, a quantidade de NaHCO3 adicionou na solução da cultura é 3.95g/L. O tampão de garrafa da cultura celular não deve ser parafusado demasiado firmemente para assegurar a troca do gás;
2. O valor de pH da solução da cultura usando pares do amortecedor de HCO3 e de CO2 é instável e tende a ser alcalino após o armazenamento por um determinado período de tempo. Se o pH das mudanças fluidas da cultura demasiado rapidamente, amortecedor de HEPES pode ser adicionado ao líquido da cultura a uma concentração final de 10-25mM;
3. HEPES é um amortecedor amphoteric, usado na maior parte na pesquisa biológica tal como a fosforilação oxidativo, a síntese da proteína em um ambiente estéril, a fosforilação fotossintética, a fixação do CO2, etc.; HEPES não tem nenhum efeito nas carcaças do ionase do metal e é apropriado para a transmissão na microscopia de elétron (TEM); em meios de cultura celular, a vantagem é que pode manter um valor de pH relativamente constante durante a observação aberta da cultura ou da pilha. HEPES (25mM) pode ser usado como um substituto para o amortecedor do bicarbonato, ou como uma adição do amortecedor do bicarbonato (10-15mM) para aliviar a limitação do ambiente da cultura do CO2 da alto-concentração. O CO2 e o bicarbonato dissolvidos são igualmente muito importantes para o bom crescimento da pilha.
