Quando você usaria um amortecedor de Hepes?

Nome completo de:Reservatório HEPESé o ácido 4-hidroxietilpiperazina-etanosulfônico, o CAS é 7365-45-9, o HEPES é frequentemente utilizado em tampões biológicos, faixa de pH tampão: 6,8-8.2, o principal componente do tampão de hepes é o ácido hidroxietilpiperazina etilo sulfúrico, o HEPES é um tampão anfotérico, que é solúvel em água e não forma complexos estáveis com íons metálicos.Tem uma boa capacidade de amortecimento no intervalo de pH de 7.2-7.4É usado principalmente em kits de diagnóstico bioquímico, kits de extração de DNA / RNA e kits de diagnóstico PCR.

Utilizado em uma variedade de reacções bioquímicas:

1. HEPESReservatórioÉ frequentemente utilizado como reagente tampão no meio de cultura celular de vários tipos de organismos, adesão célula-célula, agregação e cultura de células a curto prazo e tampão para limpeza de tecidos e células;

2Na investigação de proteínas, o PIPES é frequentemente utilizado como componente e eluente do tampão de ligação na cromatografia por troca de catiões;

3Na investigação do ADN, o PIPES é utilizado como amortecedor para o fosfato de cálcio e o sistema de formação de precipitados de ADN, e como amortecedor para experimentos de AFM e electroporação.

4Além disso, o HEPES tem uma certa interferência na reacção entre o ADN e as enzimas de restrição e não é adequado para o método de Lowry para determinar o teor de proteínas.

5O tampão HEPES é frequentemente utilizado na investigação de organelas e proteínas e enzimas altamente variáveis e sensíveis ao pH, bem como em kits de diagnóstico bioquímico,Kit de extracção de ADN/ARN e kit de diagnóstico por PCR.

6. O tampão de reação, tampão de pré-hibridação e tampão de hibridação para separar e analisar componentes nucleares de RNA; usado para RNA e T4RNA.O grau de biologia molecular é usado para rotular a extremidade 3' do RNA com a ligase de RNA T4, separar e analisar os componentes do tampão de reação, tampão de pré-hibridação e tampão de hibridação de RNA nuclear.

HEPES em pó

Questões relacionadas com o HEPES

1O pH necessário para a maioria das células é de 7,2-7.4Os fibroblastos preferem um pH mais alto (7,4-7,7), enquanto a passagem de linhas celulares transformadas requer acidez.0-7.4) Uma vez que a maioria dos fluidos de cultura é tamponada pelo sistema de bicarbonato de sódio (NaHCO3) e CO2,A concentração de CO2 na fase gasosa deve estar em equilíbrio com a concentração de bicarbonato de sódio no fluido de culturaSe a concentração de CO2 na fase gasosa ou no ar da incubadora for fixada em 5%, a quantidade de NaHCO3 adicionada à solução de cultura é de 1,97 g/l; se a concentração de CO2 for mantida em 10%,a quantidade de NaHCO3 adicionada na solução de cultura é de 3.95 g/l. A tampa do frasco de cultura celular não deve ser atornilhada com demasiada força para assegurar a troca de gases;

2O valor de pH da solução de cultura utilizando o par tampão HCO3 e CO2 é instável e tende a ser alcalino após armazenamento durante um determinado período de tempo.Se o pH do fluido de cultura mudar demasiado rapidamente, o tampão HEPES pode ser adicionado ao fluido de cultura até uma concentração final de 10-25 mM;

3. O HEPES é um amortecedor anfótero, utilizado principalmente em investigação biológica, como fosforilação oxidativa, síntese de proteínas num ambiente estéril, fosforilação fotossintética, fixação de CO2, etc.;O HEPES não tem qualquer efeito sobre os substratos da ionase metálica e é adequado para transmissão em microscopia eletrónica (TEM).No meio de cultura celular, a vantagem é que pode manter um valor de pH relativamente constante durante a cultura aberta ou a observação celular.ou como adição de amortecimento de bicarbonato (10-15mM) para aliviar a restrição do ambiente de cultura de CO2 de alta concentraçãoO CO2 dissolvido e o bicarbonato também são muito importantes para um bom crescimento celular.