Especificação para a utilização de substrato cromogénico DAOS 83777-30-4: Detalhes para determinar a precisão da detecção

No domínio do diagnóstico in vitro (DIV), os substratos cromogénicos servem como reagentes-chave para reacções enzimáticas,e o seu desempenho afeta directamente a sensibilidade e a precisão dos resultados de detecçãoN-Etil-N - (2-hidroxi-3-sulfopropil) -3,5-dimetoxianilina sal de sódio (Reagente DAOS), como um novo substrato de peroxidase, é amplamente utilizado em ensaios bioquímicos clínicos devido à sua elevada sensibilidade e baixa interferência de fundo.Os requisitos rigorosos para os detalhes operacionais durante a sua utilização tornam-se frequentemente um fator chave que determina a precisão da detecçãoEste artigo analisará as especificações principais utilizadas no DAOS a partir de quatro dimensões: dissolução, armazenamento, otimização do sistema de reação e controle de qualidade.

1,Dissolver: formulado com precisão para evitar perda de atividade

DAOS é um reagente sólido em pó, e sua dissolução deve seguir estritamente os princípios de "baixa temperatura, evitando a luz, e agitação lenta".o meio de dissolução deve ser uma solução tampão de fosfato com pH 5.5-7.0 para evitar danos na estrutura do substrato causados por ambientes ácidos ou alcalinos.O processo de dissolução deve ser realizado num banho de gelo para evitar o sobreaquecimento local e a degradação.. Ao agitar, utilize um agitador magnético para controlar a velocidade e evitar a geração de bolhas devido a agitação violenta, o que pode causar oxidação dos ingredientes ativos.É necessário filtrá-lo através de uma membrana de filtro para remover impurezas insolúveis e evitar a ocorrência de valores de absorção não específicos em reações subsequentes..

DAOS em pó

2,Armazenagem: embalar e evitar a luz, prolongar a vida útil

A estabilidade da solução DAOS é significativamente afetada pela luz, temperatura e oxigénio.O pó não utilizado deve ser selado e armazenado num ambiente de baixa temperatura para evitar aglomerações causadas por ciclos de congelamento- descongelamento repetidos.A solução de DAOS dissolvida deve ser dividida em frascos opacos castanhos de acordo com a quantidade de utilização única, com uma capacidade não superior a 5 ml por frasco, para reduzir o número de aberturas.Recomenda- se controlar a temperatura de armazenagem entre 2-8 °C e utilizá-la o mais rapidamente possível.Se a cor da solução mudar de incolor para amarelo claro ou aparecer precipitação, indica que o substrato foi oxidado e é ineficaz.e precisa ser substituído imediatamente.Quando armazenados durante muito tempo, podem ser adicionados antioxidantes adequados, mas o seu impacto no sistema de detecção precisa ser verificado através de experiências prévias.

3,Sistema de reação: otimização de parâmetros, equilíbrio de sensibilidade e especificidade

A eficiência de reação entre DAOS e peroxidases (como a peroxidase do rabanete, HRP) é influenciada por três fatores: pH, temperatura e concentração do substrato.Recomenda-se utilizar um sistema tampão com pH 6.0-7.0, onde a atividade enzimática e a solubilidade do substrato atingem o equilíbrio ideal.O controlo da temperatura deve seguir rigorosamente as instruções do reagente para evitar flutuações de temperatura susceptíveis de provocar desvio dos valores de absorção.Em termos de concentração de DAOS, recomenda-se determinar a dose ideal através da titulação do tabuleiro de xadrez.Enquanto que se for muito baixo, reduzirá a sensibilidade de detecção.

4,Controle de qualidade: Monitorização completa do processo para garantir a rastreabilidade dos resultados

Para assegurar a precisão da detecção, é necessário estabelecer um sistema completo de controlo da qualidade do processo, desde a preparação do reagente até à análise dos resultados.O processo de preparação requer o registo do tempo de dissolução10% de cada lote de fluido de trabalho devem ser mantidos como amostra para reexame.O processo de reação requer a criação de controles em branco (excluindo enzimas) e controles positivos (normas de concentração conhecidas), e verificar a eficácia da reação através da taxa de alteração dos valores de absorção.

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