A chave para o êxito da experiência de processamento DEPC do ARN tampão Tris

Na pesquisa de biologia molecular, o sucesso ou fracasso das experiências de RNA muitas vezes depende de um aspecto muitas vezes negligenciado - a qualidade da água experimental.Quando os pesquisadores realizam experimentos relacionados com RNA, a água utilizada para preparar o amortecedor deve satisfazer padrões elevados.quantidades de enzima de ARN que possam existir na solução podem degradar continuamente amostras de ARN durante o processo experimental, levando em última análise a desvios ou mesmo falhas nos resultados experimentais.

Degradação contínua de enzimas de ARN

A ameaça das enzimas de RNA é onipresente. Estas moléculas de proteína estáveis podem resistir à esterilização a altas temperaturas e manter a atividade sob várias condições experimentais.Uma vez que eles estão presentes no buffer, eles agem como "tesouras moleculares", cortando a cadeia completa de RNA em fragmentos.Mas é suficiente para fazer experimentos subsequentes como transcrição reversa e PCR quantitativa falhar..

TRIS Pó

O princípio inibitório do DEPC

O DEPC, como inibidor clássico das enzimas do ARN, desempenha um papel importante na garantia da integridade do ARN.e grupos hidroxilo de várias enzimas, e alterando a estrutura química desses grupos, pode destruir o local de ligação da enzima, fazendo com que ela perca atividade catalítica.Este modo de acção pode não inibir completamente todos os tipos de nucleases., mas pode fornecer proteção confiável em experimentos de RNA de rotina.

Efeito protetor do tampão de processamento DEPC

O tampão de Tris tratado com DEPC cria uma barreira protetora eficaz para amostras de RNA.fazendo com que estas moléculas enzimáticas percam a sua capacidade de degradar RNAQuando os pesquisadores usam tais tampões para extração, purificação ou preservação de RNA, eles podem reduzir o risco de perda de RNA em etapas críticas.

Em aplicações práticas, o valor do processamento do tampão Tris por DEPC reflete-se em várias fases experimentais.à precipitação e lavagem do ARN, e, finalmente, à dissolução e conservação, a solução tampão tratada com DEPC pode fornecer proteção contínua para a integridade do ARN em cada etapa.Este efeito protetor é particularmente evidente na manipulação de amostras de rastreamento de RNA, uma vez que quanto menor for o tamanho da amostra, mais proeminente é o impacto da contaminação por RNAse.

Métodos de eliminação de resíduos de DEPC

Vale ressaltar que a solução tampão tratada com DEPC deve ser submetida a altas temperaturas e pressões para remover o DEPC residual antes da utilização.Isto porque, embora o DEPC possa inactivar eficazmente as enzimas de RNAApesar de esta etapa poder parecer complicada, é necessária para assegurar a fiabilidade dos resultados experimentais.

A importância da protecção básica para as experiências

A escolha dos investigadores do tampão Tris tratado com DEPC é essencialmente a criação de um programa de protecção para o experimento.não altera o processo básico da experiênciaQuando existem anormalidades nos dados experimentais, quando as amostras de ARN se degradam repetidamente e quando não se podem obter resultados estáveis a partir de experimentos repetidos,A qualidade da solução tampão é muitas vezes uma direção que vale a pena verificar.

Do ponto de vista do desenho experimental, controlar a contaminação por enzimas de RNA é uma tarefa fundamental.A realização de experimentos de RNA também requer um sistema de reação puraO tampão Tris processado pelo DEPC constitui uma parte indispensável deste sistema básico, não só como reagente, mas também como garantia da fiabilidade dos resultados experimentais.

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