Selecção da concentração do tampão HEPES 7365-45-9 em cultura celular

A manutenção de um valor de pH estável durante a cultura celular é um dos factores-chave para assegurar um crescimento e proliferação celulares saudáveis.Reservatório HEPESA solução de hidrogénio é amplamente utilizada no campo da cultura celular como um importante amortecedor de iões de hidrogénio devido à sua capacidade de proporcionar efeitos de amortecimento estáveis numa ampla gama de pH (6,8 a 8,2).Este artigo irá explorar em pormenor a selecção da concentração de HEPES em cultura celular, destinado a fornecer orientações práticas aos investigadores.
 

 
Aplicação do HEPES em culturas celulares
 
A função principal do HEPES na cultura celular é manter a estabilidade do pH do meio de cultura.A entrada de dióxido de carbono do ar no frasco de cultura pode causar um aumento do valor de pH do meio de culturaA adição de HEPES pode prevenir eficazmente este fenómeno e manter o pH dentro de um intervalo adequado.

 

 
HEPES em pó
 
Determinar a concentração adequada de HEPES
 
1Diferenças na linha celular
 
Existem diferenças na procura de concentração de HEPES entre linhas celulares diferentes.Pode ser necessário determinar a concentração ideal através de experimentos com gradiente de concentração.É possível fixar um gradiente de concentração de 2 mM a partir da gama convencional de 10 a 25 mM para observar o estado de crescimento, a taxa de proliferação,e atividade metabólica das células em diferentes concentrações, a fim de encontrar a concentração HEPES mais adequada para a linha celular.
 
2A influência da composição do meio de cultura
 
O HEPES interage com outros sistemas tampão no meio de cultura, tais como sistemas tampão de bicarbonato.a quantidade ideal de HEPES adicionada também pode variar em conformidadeA investigação demonstrou que o aumento da concentração de HEPES para 30 mM, reduzindo a concentração de bicarbonato, pode melhor manter a estabilidade do pH para o crescimento celular e promover a proliferação celular.
 
3A influência da temperatura
 
A temperatura é um fator importante que afeta a taxa metabólica das células, que por sua vez afeta a demanda da célula por pH.O HEPES pode efetivamente exercer um efeito amortecimentoNo entanto, para algumas células especiais, tais como certas células de insectos, a sua temperatura de cultura ideal pode ser mais baixa.Como as mudanças de temperatura podem alterar a atividade enzimática e as vias metabólicas dentro das células, o que pode conduzir a alterações na taxa de produção de ácido ou álcali.
 
Métodos para melhorar o efeito tampão do HEPES
 
1. Otimizar a frequência de mudança de fluido
 
As mudanças frequentes de fluido podem resultar na diluição do HEPES antes de a sua capacidade de amortecimento ser totalmente utilizada.é crucial estudar as taxas metabólicas de diferentes linhas celulares e determinar a frequência adequada de troca de fluidosPara as células com metabolismo lento, o intervalo entre as mudanças de fluido pode ser prolongado de forma adequada para assegurar o efeito tampão sustentado e estável do HEPES no meio de cultura,reduzir o impacto das alterações dos fluidos no ambiente de crescimento celular.
 
2. Reduzir as perdas de HEPES
 
Durante o armazenamento e utilização do meio de cultura, factores como a exposição à luz e a alta temperatura podem conduzir à degradação do HEPES.Recomenda-se armazenar o meio de cultura em frascos de vidro castanho para evitar a influência da luz no HEPES.Ao mesmo tempo, ao configurar o meio de cultura, deve seguir-se o princípio da utilização e preparação no local para reduzir a perda de HEPES causada pelo armazenamento a longo prazo,assegurar que se mantém uma concentração efetiva durante todo o processo de cultura celular, e reforçar o efeito tampão.
 
 

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