Por que o tampão HEPES 7365-45-9 é usado na detecção da lactato desidrogenase

A lactato desidrogenase (LDH), como uma das enzimas- chave na via de glicólise intracelular, sofre alterações na sua actividade em várias condições patológicas.A medição precisa da actividade da LDH não é apenas de grande importância para a investigação científica básicaA escolha do amortecedor adequado é um dos factores-chave para garantir a exactidão dos resultados dos testes durante este processo.

Ácido etanosulfónico de 4-hidroxietilpiperazina (Reservatório HEPES), como amortecimento biológico amplamente utilizado, está gradualmente a tornar-se o componente central dos kits de detecção da lactato-desidrogenase.Este artigo irá analisar em pormenor a partir de múltiplas perspectivas por que o tampão HEPES é usado na detecção da lactato desidrogenase.

Reservatório HEPES

1, Características básicas do HEPES

O HEPES é um amortecedor zwitteriónico que contém grupos amino e carboxilo, com fórmula molecular C8H18N2O4S.e sólido inodoro com boa solubilidade em água e estabilidade química.

O intervalo de amortecimento do HEPES está entre o pH 6,8 e 8.2, e para a detecção de LDH, o seu ambiente catalítico é geralmente dentro desta faixa de pH.O HEPES pode efetivamente manter a estabilidade das condições de reação e garantir a precisão da medição da atividade enzimáticaAlém disso, a capacidade de amortecimento do HEPES não é afectada pela concentração de CO2, o que é particularmente importante para a cultura celular e as reacções bioquímicas em ambientes abertos.

2Aplicação do HEPES na detecção de LDH

O HEPES, como um dos componentes principais do kit de detecção da lactato desidrogenase, desempenha várias funções.com reagente I contendo tampão biológico HEPES, complexo de íons metálicos, substrato de reação LDH, surfactante, activador da enzima LDH, conservante e água; o reagente II consiste em HEPES, nicotinamida adenina dinucleótido oxidado NAD+, surfactante,conservanteA adição de diferentes componentes funcionais por separado permite controlar melhor as condições de reação e reduzir a interferência causada pela turbidez da própria amostra.

3, Melhorar a precisão e a eficiência da detecção

Boa estabilidade: o efeito tampão fornecido pelo HEPES garante a estabilidade do pH durante todo o processo de detecção, o que é crucial para a medição da atividade enzimática.

Alta precisão: Ao otimizar a fórmula e implementar medidas rigorosas de controlo de qualidade, são assegurados resultados consistentes para cada ensaio.

Ampla gama de testes lineares: capaz de cobrir uma ampla gama de níveis de atividade da LDH, adaptar-se a diferentes tipos de amostras e satisfazer diferentes necessidades clínicas.

Forte capacidade anti-interferência: resiste eficazmente à influência de fatores externos, tais como alterações de temperatura ou impurezas da amostra, garantindo a autenticidade dos dados.

Sem necessidade de pré- diluição: simplifica as etapas experimentais, reduz o tempo de detecção, especialmente adequado para ambientes clínicos movimentados.

4, Princípio de reação e medição

O processo de redução catalisada por LDH do ácido pirúvico em ácido L-láctico é uma reação reversível, e quando a concentração de ácido láctico é alta, promove a reação inversa, ou seja,A síntese de ácido pirúvico a partir de ácido láctico. Sob condições de pH adequadas mantidas no tampão HEPES, o ácido L-láctico reage com NAD+ para produzir ácido pirúvico e NADH. O NADH apresenta absorção característica a um comprimento de onda de 340 nm,o que significa que a actividade da LDH pode ser quantificada através do controlo das alterações na absorção.

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