Quais os fatores que podem afectar a eficácia da utilização do ADPS como substrato cromogénico?

No campo da detecção e diagnóstico biológico, o substrato cromogênico sal de sódio N-etil-N-(3-sulfopropil)-3-metoxianilina (Reagente ADPS) tornou-se um reagente chave em ensaios imunoenzimáticos (ELISA), análises bioquímicas e outros cenários devido à sua alta sensibilidade e estabilidade. No entanto, seu desempenho real é frequentemente afetado por múltiplos fatores, levando a flutuações na intensidade da cor, interferência de fundo ou baixa repetibilidade.

1, Qualidade do substrato

Pureza química: A presença de impurezas pode causar coloração não específica ou inibição competitiva. Por exemplo, intermediários incompletamente reagidos podem interferir na ligação de enzimas a substratos, levando a um sinal de cor enfraquecido. A escolha de matérias-primas ADPS de alta pureza (≥ 98%) é um pré-requisito para garantir a eficácia.

Pó ADPS

Uniformidade das partículas: ADPS geralmente existe em forma de pó ou cristalina. Se o tamanho das partículas não for uniforme, pode levar a diferenças na taxa de dissolução, afetando a uniformidade da concentração no sistema de reação. Partículas grosseiras também podem entupir microplacas ou tubulações de instrumentos, e a otimização por meio de moagem ou peneiramento é necessária.

Estabilidade de armazenamento: ADPS é sensível à luz, umidade e temperatura. A exposição prolongada à luz forte pode desencadear reações de fotólise, produzindo produtos incolores ou de baixo desenvolvimento de cor; No entanto, ambientes de alta umidade podem fazer com que ele absorva umidade e se aglomere, afetando a precisão da pesagem. Recomenda-se armazenar separadamente em condições escuras, secas e de baixa temperatura para evitar congelamento e descongelamento repetidos.

2, Condições de reação

Correspondência do valor de pH: O centro ativo da enzima é altamente sensível ao pH. Se o pH do tampão desviar dessa faixa, a atividade da enzima pode diminuir, resultando em intensidade de cor ADPS insuficiente. Sistemas tampão de fosfato, carbonato e outros devem ser selecionados com base nas características da enzima alvo e calibrados com precisão usando um medidor de pH.

Controle de temperatura: O aumento da temperatura pode acelerar o movimento molecular e aumentar a frequência de colisão entre enzimas e substratos, mas exceder a temperatura ideal pode causar desnaturação e inativação da enzima, resultando em uma diminuição no sinal de cor ADPS.

3, Padronização operacional

Dissolução e diluição: O pó ADPS deve ser dissolvido em água deionizada ou solução tampão especializada, evitando o uso de soluções contendo íons metálicos ou solventes orgânicos. Ao dissolver, agite ou mexa suavemente para evitar a produção de bolhas devido à agitação violenta, o que pode resultar em uma concentração real mais baixa. Dilua de acordo com um gradiente e misture completamente para evitar concentração local excessiva.

Seleção da solução de terminação: Após a conclusão da reação de cor, a solução de terminação deve ser adicionada imediatamente para fixar a cor. Se a terminação não for oportuna, os produtos de cor podem continuar a se decompor, resultando em uma diminuição nos valores de absorbância; No entanto, o desvio de pH ou concentração da solução de terminação pode alterar as características espectrais do produto, afetando a precisão da detecção.

4, Fatores de interferência externa

Interferência da amostra: Hemoglobina, lipídios ou metabólitos de drogas em amostras de sangue podem inibir a atividade enzimática por meio de adsorção ou reações químicas, ou se ligar diretamente ao ADPS para formar complexos incolores.

Reação cruzada do reagente: Se houver compostos com estruturas semelhantes ao ADPS no sistema de detecção (como outros substratos de anilina), pode causar desenvolvimento de cor não específico.

Contaminação do recipiente: Se a microplaca ou a placa colorimétrica não for completamente limpa, ela pode reter enzimas ou substratos da remessa anterior, levando a resultados falso-positivos.

O uso expirado do pó ADPS não apenas leva à distorção dos dados experimentais, mas também pode causar riscos à segurança. Portanto, ao comprar e usar o pó ADPS, é importante prestar atenção à data de produção e validade, e manusear cientificamente o pó ADPS expirado. Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. é especializada na produção de novos reagentes de Trinder, como ADPS. Se você tiver alguma necessidade relacionada, entre em contato comigo a qualquer momento!

Embalagem do produto

O uso expirado do pó ADPS não apenas leva à distorção dos dados experimentais, mas também pode causar riscos à segurança. Portanto, ao comprar e usar o pó ADPS, é importante prestar atenção à data de produção e validade, e manusear cientificamente o pó ADPS expirado. Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. é especializada na produção de os novos reagentes de Trinder como ADPS. Se você tiver alguma necessidade relacionada, entre em contato comigo a qualquer momento!